測序在手，文章我有

肺鱗狀細(xì)胞癌（lung squamous cell carcinoma ，LUSC）是非小細(xì)胞肺癌的主要亞型之一，而非小細(xì)胞肺癌占所有人類肺癌的80-85%。circRNA被鑒定為多種癌癥中的重要調(diào)節(jié)因子，但在LUSC中尚未見報道。于是，這篇影響因子11.878、以測序為基礎(chǔ)展開研究的文章應(yīng)運而生。

研究思路如下：


一、circTP63 is upregulated in LUSC. 測序發(fā)現(xiàn)circTP63在LUSC表達(dá)上調(diào).

1.通過對測序結(jié)果進(jìn)行分析及實驗驗證，選定circTP63為研究對象

2.在35對臨床樣本中進(jìn)行驗證

二、Characteristics of circTP63 in LUSC cells.分析circTP63序列

1. 分析circTP63序列

2. 檢測細(xì)胞系中circTP63的表達(dá)，選定SW900、H1703用于功能缺失實驗， H226、H2170用于功能獲得實驗

三、circTP63 promotes cell proliferation and tumor growth. circTP63促進(jìn)細(xì)胞增殖和腫瘤增長
   細(xì)胞實驗：

1. 干擾 circTP63，抑制細(xì)胞生長

2. 過表達(dá)circTP63,提高細(xì)胞活力

3. 挽救實驗，表明circTP63的確可以促進(jìn)細(xì)胞增殖

   體內(nèi)實驗：
  利用H2170建立裸鼠異種移植模型，發(fā)現(xiàn)circTP63促進(jìn)腫瘤生長。

四、circTP63 facilitates cell proliferation by targeting FOXM1.circTP63通過FOXM1促進(jìn)細(xì)胞增殖

1. circTP63、mRNA共表達(dá)模式分析，得到25個可能的靶標(biāo)mRNA，其中FOXM1，KIF18B和BRCA1相關(guān)性位居前三

2. 對測序結(jié)果進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)FOXM1在LUSC中顯著上調(diào)

3.  在35對臨床樣本中驗證FOXM1的表達(dá)，并檢測circTP63與mRNA表達(dá)的相關(guān)性，最終，選定FOXM1為主要候選目標(biāo)。

五、circTP63 relieves repression of miR-873-3p on FOXM1.circTP63具有ceRNA功能通過預(yù)測選定miR-873-3p后，利用熒光素酶報告系統(tǒng)、免疫沉淀進(jìn)行驗證。

六、CENPA and CENPB are regulated by circTP63 through FOXM1.circTP63通過調(diào)控FOXM1進(jìn)而調(diào)控CENPA/B，促進(jìn)細(xì)胞增殖

1. 過表達(dá)circTP63，檢測8個候選基因表達(dá)水平發(fā)現(xiàn)，CENPA，CENPB， CCNB1受circTP63調(diào)節(jié)

2. 干擾FOXM1，circTP63對CENPA和CENPB的作用顯著減弱

3.敲除CENPA和CENPB同時過表達(dá)circTP63,circTP63對細(xì)胞增殖的促進(jìn)作用降低
 
綜上所訴，circTP63作為ceRNA調(diào)控FOXM1，促進(jìn)肺鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)展。