外泌體介導的鐵離子轉運調(diào)節(jié)鐵死亡抗性
研究背景：
鐵死亡是新發(fā)現(xiàn)的一種程序性細胞死亡方式。它是2012年研究人員通過篩選發(fā)現(xiàn)小分子化合物erastin介導的一種特殊細胞死亡方式。它的基本特征包括脂質活性氧聚集和依賴于鐵。在細胞形態(tài)和分子機制上，鐵死亡與細胞凋亡有顯著區(qū)別。鐵死亡發(fā)生時，線粒體發(fā)生皺縮、膜密度增加和膜完整性收到破壞。鐵螯合劑能抑制鐵死亡，而其他凋亡、自噬相關抑制劑無法抑制鐵死亡。在病理性的細胞損傷和癌癥中，鐵死亡都扮演了重要的角色。
鐵死亡中的很多分子機制尚未明確，不同細胞間的鐵死亡抗性為何不同也存在巨大疑問。在近期發(fā)表于Development Cell上的Prominin2 Drives Ferroptosis Resistance by Stimulating Iron Export [1]一文為這些問題提供了新的答案。
當上皮細胞，即那些在體腔表面排列的上皮細胞，脫離被稱為細胞外基質(ECM)的支架狀蛋白的網(wǎng)狀結構時，就會引起細胞死亡。在之前的研究中，該文作者發(fā)現(xiàn)了細胞外基質去除（ECM detachment）后會促進鐵死亡的發(fā)生[2]。但在該條件下，仍有細胞能夠存活。于是作者通過RNA-seq找到了ECM detachment條件下表達顯著上調(diào)的Prominin2（PROM2）（圖1A）。并提出猜想：PROM2與鐵死亡抵抗相關。
本文技術路線：
作者首先證明了鐵死亡誘導了PROM2的表達，結果如圖1所示。在乳腺癌細胞系MCF10A和Hs578t中，GPX4共價結合抑制劑RSL3處理能顯著上調(diào)PROM2的表達（圖1D）。同時，鐵死亡抑制劑ferrostatin-1的處理能顯著回復干擾PROM2后的ECM detachment細胞死亡增多（圖1C）。
圖1 Prominin2是鐵死亡響應蛋白
接下來作者檢測了PROM2是否影響鐵死亡。在MCF10A和Hs578t細胞中使用不同類型的鐵死亡激活劑處理后，敲低PROM2能顯著增加細胞的鐵死亡敏感性（圖2A-B）。而過表達PROM2則有相反的效果（圖2D）。
圖2 Prominin2能提升鐵死亡抵抗能力
在發(fā)現(xiàn)這些表型后，作者開始探究PROM2調(diào)節(jié)鐵死亡的分子機制。免疫熒光檢測鐵死亡過程中PROM2的細胞定位結果顯示：PROM2與multivesicular bodies (MVBs)分子標志TSG101共定位。干擾PROM2后，MVBs的形成收到阻礙（圖3D-E）。同時，作者也證實了MVBs的形成是細胞逃逸鐵死亡所必須的。
圖3 在抑制GPX4誘導鐵死亡的情況下，Prominin2促進MVBs的形成
作者猜想該過程中MVBs轉運了某種促進鐵死亡的因子至細胞外從而促進了鐵死亡抵抗。同時前人報道了鐵儲存蛋白ferritin能通過外泌體轉分泌到細胞外[3]。因此作者提出了外泌體轉運ferritin至胞外抑制鐵死亡的假說。實驗結果表明，RSL3處理激活鐵死亡后，阻斷PROM2或ferritin能顯著提升細胞內(nèi)自由鐵離子濃度（圖4A-B）。
圖4 Prominin2和Ferritin調(diào)節(jié)抑制GPX4后的細胞內(nèi)自由鐵離子濃度
參考文獻：
1.Brown, C.W., et al., Prominin2 Drives Ferroptosis Resistance by Stimulating Iron Export. Dev Cell, 2019.
2.Brown, C.W., J.J. Amante, and A.M. Mercurio, Cell clustering mediated by the adhesion protein PVRL4 is necessary for alpha6beta4 integrin-promoted ferroptosis resistance in matrix-detached cells. J Biol Chem, 2018. 293(33): p. 12741-12748.
3.Truman-Rosentsvit, M., et al., Ferritin is secreted via 2 distinct nonclassical vesicular pathways. Blood, 2018. 131(3): p. 342-352.