nature methods報道分析自噬的新標志：p-ATG16L1-s278

   自噬是一種高度保守的經溶酶體介導的對細胞內蛋白質和細胞器進行降解、維持細胞內環(huán)境的自身穩(wěn)定的過程。它在正常生理過程和許多疾病中都發(fā)揮著重要調節(jié)作用，也一直是研究的熱點之一。
   對自噬水平的檢測方法也很多，這里簡要介紹一些。首先是電子顯微鏡對自噬體的觀察。在超微結構水平上，自噬體是一種雙層膜結
構，包裹著尚未消化的胞內細胞器。在電子顯微鏡下觀察到雙層膜自噬體結構是確認自噬體結構的金標準，其數量和大小也是自噬水平的標志。其次是標志物?LC3/Atg8和?p62/SQSTM1的檢測。最后是自噬流檢測。bafilomycin?A1等自噬相關工具藥物處理后檢測LC3B-I/II轉化水平。GFP-LC3B融合蛋白標記；通過游離GFP蛋白或者熒光顯微鏡觀察GFP信號的點狀聚集評價自噬流水平。mRFP/mCherry-GFP-LC3B串聯熒光蛋白檢測自噬流水平。根據兩種熒光蛋白在自噬溶酶體中的不同耐受能力而反映自噬流水平。
  近期國際頂級生化研究方法雜志nature methods上發(fā)表一篇使用p-ATG16L1-s278檢測自噬水平的文章，小編在這推薦給大家。
 

  前人報道中指出ULK能調節(jié)ATG16L1第278位絲氨酸的磷酸化，作者為了進一步研究該位點修飾的功能，開發(fā)了這點該修飾的特異性抗體。在證明該抗體的特異性后，作者指出：在多重刺激誘導的自噬下，p-ATG16L1-s278是一種保守的自噬激活指示。如圖一所示。免疫熒光分析結果也顯示了p-ATG16L1-s278在自噬激活后被募集至自噬體膜上。同時，p-ATG16L1-s278水平提供了一種獨立于后期自噬阻滯的可靠的自噬率測量，并直接反映了自噬囊泡的形成。

                                圖1在多重刺激誘導的自噬下，p-ATG16L1-s278是一種保守的自噬激活指示
   作者認為：在一個定義明確的系統(tǒng)中，p-ATG16L1-s278水平變化與LC3B-II一致。然而，在缺乏溶酶體抑制劑的情況下p-ATG16L1-s278很有可能獲得了更可靠的結果。這種分析的可靠性很可能是在更具技術挑戰(zhàn)性的實驗中獲得更大的收益，如極少的細胞數了或不適合藥物處理的情況。在內源性水平檢測自噬的應用中，p-ATG16L1-s278抗體在各種組織、不同實驗中都能更方便有效的發(fā)揮效果。此外，對p-ATG16L1-s278的分析可能會開辟研究自噬的誘導和調控機制的新途徑。
   最后，作者強調：我們還沒有確定在特定條件下僅使用p-ATG16L1-s278分析自噬有沒有誤導的困難，但這很有可能存在。因此，結合多種自噬分析方法仍然是自噬研究關鍵。盡管如此， p-ATG16L1-s278對于自噬研究者來說，這是一個令人興奮的工具。