LncRNA與周期蛋白抑制劑耐藥性

    雌激素受體陽(yáng)性（ER +）乳腺癌約占所有乳腺癌的三分之二，并有持續(xù)晚期疾病復(fù)發(fā)的風(fēng)險(xiǎn)。細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶4和6（CDK4 / 6）抑制劑在ER +乳腺癌中已顯示出顯著療效。但是，它們的作用仍然受到耐藥性的限制。今天這篇研究探討lncRNA在ER +乳腺癌中的作用，帶我們熟悉了解lncRNA的研究思路。

技術(shù)路線:

結(jié) 果:
1. ER +乳腺癌中LncRNA TROJAN高表達(dá)并預(yù)測(cè)差生存
    乳腺癌和正常人組織中TROJAN表達(dá)增高，數(shù)據(jù)庫(kù)顯示TROJAN與不良生存相關(guān)，TROJAN是獨(dú)立的預(yù)后因素。GO分析表明TROJAN相關(guān)基因中細(xì)胞周期相關(guān)基因的富集程度更高。TROJAN可能會(huì)通過(guò)細(xì)胞周期調(diào)節(jié)ER +乳腺癌的進(jìn)展。

2. 抗TroJAN ASO治療使ER +乳腺癌對(duì)PD致敏
    使用ASO評(píng)估TROJAN在ER +乳腺癌中的治療潛力。ASO轉(zhuǎn)染的T47D細(xì)胞表現(xiàn)出降低的TROJAN表達(dá)以及降低的增殖能力，ASO和CDK4 / 6抑制劑（palbociclib，ribociclib和abemaciclib）可聯(lián)合抗癌功效比單獨(dú)抑制劑高。

3. TROJAN下調(diào)通過(guò)誘導(dǎo)G1 / S細(xì)胞周期停滯抑制ER +乳腺癌增殖
    細(xì)胞敲低TROJAN增殖潛能受損害, 過(guò)表達(dá)促進(jìn)增殖。構(gòu)建雌性裸鼠乳腺脂肪墊注射模型，以研究TROJAN對(duì)體內(nèi)ER +乳腺癌增殖的影響。下調(diào)TROJAN顯著降低腫瘤體積，轉(zhuǎn)錄基因芯片分析TROJAN下調(diào)的細(xì)胞中與周期有關(guān)的生物過(guò)程發(fā)生顯著變化。TROJAN的下調(diào)導(dǎo)致G1期細(xì)胞增加，Cyclin E1 / 2降低，P21 / P27升高，增殖標(biāo)記MKI67陽(yáng)性少，在含PD的培養(yǎng)基中，PDR細(xì)胞的生長(zhǎng)速度高于MCF7細(xì)胞和TROJAN敲低的PDR細(xì)胞。這些表明TROJAN通過(guò)調(diào)節(jié)G1 / S細(xì)胞周期促進(jìn)ER +乳腺癌進(jìn)展。

4. ER +乳腺癌中TROJAN與NKRF蛋白有關(guān)
    進(jìn)一步探索TROJAN在ER +乳腺癌中的潛在的機(jī)制， 篩選出NKRF作為ER +乳腺癌中重要的TROJAN相互作用蛋白。TROJAN和NKRF在細(xì)胞核中共定位，異位表達(dá)全長(zhǎng)FlagNKRF以及三個(gè)突變體：截短的R3H結(jié)構(gòu)域（ΔNKRF-1）突變體，截短的R3H + G-patch域（ΔNKRF-2）突變體和NKRF N端（ΔNKRF-3）突變體。RIP分析表明刪除R3H + G域，但不能僅刪除R3H域，可取消TROJAN-NKRF相互作用。已知G-patch結(jié)構(gòu)域具有RNA結(jié)合功能，因此TROJAN可以結(jié)合到NKRF的G-patch域。敲低NKRF 促進(jìn)MCF7細(xì)胞的增殖，TROJAN敲低導(dǎo)致的增殖抑制可被另外的敲低NKRF減弱，這表明TROJAN敲低誘導(dǎo)的表型可能由NKRF部分營(yíng)救。

5. TROJAN通過(guò)NKRF調(diào)節(jié)CDK2轉(zhuǎn)錄
    為研究TROJAN調(diào)控的下游靶標(biāo)，分析TROJAN敲低的MCF7細(xì)胞微陣列數(shù)據(jù)，發(fā)現(xiàn)TROJAN敲低下調(diào)694個(gè)基因， 51個(gè)基因與TROJAN呈正相關(guān)，包括8個(gè)細(xì)胞周期有關(guān)基因。TROJAN敲低增加CDK2，NKRF敲低降低了蛋白的表達(dá)，TROJAN和NKRF的組合恢復(fù)了CDK2的表達(dá)。TROJAN敲除可抑制CDK2啟動(dòng)子活性，被NKRF敲除激活。在異種移植模型， 在TROJAN敲除腫瘤中CDK2的表達(dá)降低。TROJAN敲低后NKRF的CDK2啟動(dòng)子上結(jié)合能力顯著增加，TROJAN敲低MCF7細(xì)胞中過(guò)表達(dá)CDK2可部分恢復(fù)增殖抑制。這些表明TROJAN阻止NKRF在CDK2啟動(dòng)子上的結(jié)合，并在轉(zhuǎn)錄水平調(diào)節(jié)CDK2的表達(dá)。

6. TROJAN與CDK2和MKI67正相關(guān)
    測(cè)定CDK2和增殖標(biāo)記MKI67在ER +乳腺癌中的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)TROJAN在mRNA和蛋白質(zhì)水平上均與CDK2和MKI67正相關(guān)。

總 結(jié)：
    1. TROJAN-NKRF-CDK2的癌癥調(diào)控模式
    2. 抗TROJAN ASO與CDK4 / 6抑制劑聯(lián)合使用是有前途的聯(lián)合抗癌療法。