lncRNA來報道：調(diào)控肺動脈高壓
導(dǎo)語：
肺動脈高壓（PAH）是一種血流動力學(xué)異常狀態(tài)，以肺血管阻力進行性增高為主要特征，后負(fù)荷增加導(dǎo)致右心室肥厚，最終可導(dǎo)致心力衰竭。主要病理基礎(chǔ)：血管收縮、肺血管重塑和原位血栓形成，血管重塑的重要細(xì)胞類型包括PASMC，成纖維細(xì)胞，內(nèi)皮細(xì)胞和周細(xì)胞等，靶向這些細(xì)胞的共同分子有哪些呢？lncRNA來報道。
技術(shù)路線：
結(jié)果：
1. 過度增殖的條件下，hPASMC和周細(xì)胞上調(diào)表達TYKRIL且與其功能相關(guān)
暴露于缺氧條件的人PASMC和肺周細(xì)胞、以及特發(fā)性PAH（IPAH）患者的人PASMC和肺周細(xì)胞表現(xiàn)出過度增殖和抗凋亡的表型。細(xì)胞RNA測序發(fā)現(xiàn)lncRNA TYKRIL在所有條件下都被上調(diào)，細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)的qRT-PCR分析表明TYKRIL同時存在于細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中。沉默TYKRIL后導(dǎo)致hPASMCs和肺周細(xì)胞增殖減少，并誘導(dǎo)促凋亡表型。
2. TYKRIL敲低減少體外模型中的肺血管重塑
肺特發(fā)性PAH患者肺血管切片中的TYKRIL表達明顯上調(diào)，沉默肺切片中TYKRIL導(dǎo)致內(nèi)側(cè)壁厚度減少，增殖細(xì)胞核抗原（PCNA）陽性細(xì)胞數(shù)量減少，TUNEL陽性細(xì)胞（凋亡檢測）增加。
3. TYKRIL通過調(diào)節(jié)PDGFRβ表達在周細(xì)胞存活和功能中起重要作用
原代人周細(xì)胞中敲除TYKRIL可有效減少增殖，損害內(nèi)皮細(xì)胞的募集和減少周細(xì)胞存活。為鑒定TYKRIL的下游靶標(biāo)，敲除lnc的原代人周細(xì)胞上進行RNA測序，發(fā)現(xiàn)各種酪氨酸激酶受體的表達下調(diào)。周細(xì)胞中TYKRIL與PDGFRβ的表達顯示出正相關(guān)，敲低TYKRIL可顯著降低PDGFRβ的表達。過表達TYKRIL導(dǎo)致TYKRIL和PDGFRβ顯著上調(diào)，LNA GapmeRs與RNA引導(dǎo)基因共轉(zhuǎn)染，消除了TYKRIL的上調(diào)并抑制了PDGFRβ表達的增加。
4. TYKRIL充當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)誘餌，減少p53–p300復(fù)合物的形成
為進一步了解TYKRIL的分子機制，評估TYKRIL缺失對轉(zhuǎn)錄因子活性的影響。沉默TYKRIL后發(fā)現(xiàn)抑癌基因p53被激活最明顯， RNA-seq通路分析表明TYKRIL敲低可調(diào)節(jié)p53信號通路相關(guān)基因。已知p53調(diào)節(jié)lncRNA的表達，但關(guān)于lncRNA依賴的活性調(diào)節(jié)機制不清楚。為研究TYKRIL如何調(diào)節(jié)p53活性，進行RNA免疫沉淀，發(fā)現(xiàn)表明TYKRIL與p53結(jié)合。為識別結(jié)合位點，進行Pull down實驗，發(fā)現(xiàn)YKRIL綁定全長p53和缺少C碳端的p53，TYKRIL不與缺乏N氮端的p53突變體（包含轉(zhuǎn)錄激活域）綁定。這些結(jié)果說明TYKRIL結(jié)合p53需要N氮端。
p53受翻譯后修飾的嚴(yán)格調(diào)控，例如乙?；土姿峄?。共激活劑，例如乙酰轉(zhuǎn)移酶p300，介導(dǎo)p53乙?；⑴cp53轉(zhuǎn)錄激活結(jié)合域，導(dǎo)致p53穩(wěn)定，并將p53–p300復(fù)合物轉(zhuǎn)運到核。因此，我們使用鄰位連接技術(shù)來分析敲低TYKRIL之后p53–p300相互作用，發(fā)現(xiàn)抑制TYKRIL表達，p53-p300核復(fù)合物的形成增加， TYKRIL過表達導(dǎo)致細(xì)胞核中p53–p300水平降低。這些結(jié)果表明TYKRIL充當(dāng)p53誘餌分子，可防止p53–p300相互作用來激活p53。為確認(rèn)TYKRIL通過p53作用于周細(xì)胞活性，沉默了p53，發(fā)現(xiàn)可防止TYKRIL依賴性的周細(xì)胞活力丟失。阿霉素誘導(dǎo)的內(nèi)源性p53激活進一步證實了激活p53抑制PDGFRβ。
5. PDGFRβ的表達受TYKRIL調(diào)控，PAH患者中TYKRIL與PDGFRβ表達正相關(guān)
為進一步評估疾病下TYKRIL介導(dǎo)PDGFRβ表達調(diào)節(jié)，檢測人肺勻漿中TYKRIL和PDGFRβ的表達，發(fā)現(xiàn)健康對照組和PAH患者肺組織中TYKRIL和PDGFRβ表達呈顯著正相關(guān)。暴露于低氧和從IPAH患者中分離的hPASMC和肺周細(xì)胞中，沉默TYKRIL會導(dǎo)致細(xì)胞PDGFRβ降低（圖6B，C，D,E）。
結(jié) 論：
1. TYKRIL維持PASMCs和周細(xì)胞的過度增殖表型，從而有助于PAH中血管的病理向內(nèi)重塑。
2. TYKRIL充當(dāng)p53誘餌，調(diào)節(jié)PDGFRβ的表達，作為一種新型的酪氨酸激酶信號通路檢查點分子。
參考文獻：Long Noncoding RNA TYKRIL Plays a Role in Pulmonary Hypertension via the p53-Mediated Regulation of PDGFRβ （AM J RESP CRIT CARE）(IF: 17.452)