想不想輕松減肥?一文讀懂GPR119的減肥密碼

欄目:最新研究動(dòng)態(tài) 發(fā)布時(shí)間:2023-03-27
本研究旨在探究GPR119信號(hào)系統(tǒng)在小鼠能量代謝和飲食行為中的作用。本研究結(jié)果表明,腸道微生物產(chǎn)生的油酸來源的......


胃腸道通過分泌激素和通過激活營養(yǎng)傳感器產(chǎn)生信號(hào)來影響生理活動(dòng)和行為。GPR119,一種脂質(zhì)傳感器,它間接參與腸內(nèi)分泌細(xì)胞的腸促胰島素分泌,如胰高血糖素樣肽-1、葡萄糖依賴性胰島素肽等,但它可直接刺激胰腺β細(xì)胞分泌胰島素。鑒于GPR119有調(diào)控肥胖和糖尿病的代謝穩(wěn)態(tài)的潛力,所以它作為治療靶點(diǎn)吸引了很多學(xué)者的研究興趣。然而,此前的研究表明在基礎(chǔ)或高脂飲食條件下,敲除GPR119不影響小鼠的葡萄糖穩(wěn)態(tài)和食欲。因此,本研究旨在探究GPR119信號(hào)系統(tǒng)在小鼠能量代謝和飲食行為中的作用。本研究結(jié)果表明,腸道微生物產(chǎn)生的油酸來源的油酰乙醇胺(OEA)激活胃腸道GPR119與能量短缺條件下的飽腹感控制和能量穩(wěn)態(tài)有關(guān)。本研究于202211月發(fā)表在《Molecular MetabolismIF8.568期刊上。

 

技術(shù)路線:


 

主要實(shí)驗(yàn)結(jié)果:

1Gpr119 KO小鼠體重減輕,能量消耗增加

采用CRISPR-Cas9基因組編輯系統(tǒng)生成Gpr119 KO小鼠,評(píng)估Gpr119的生理作用。在FF條件下維持的Gpr119 KO小鼠比同窩的WT小鼠表現(xiàn)出更低的體重(圖1A)。然而,在FF條件下,WTGpr119 KO小鼠的生長、食物攝入量(圖1C)和血糖水平(圖1E)沒有觀察到差異。此外,在FF條件下,血漿三酰甘油(TG;圖1F),非酯化脂肪酸(NEFA;圖1G)和總膽固醇(圖1H)水平在WTGpr119 KO小鼠間也無差異。因此,作者進(jìn)一步評(píng)估這些小鼠的能量代謝和運(yùn)動(dòng)能力。


1Gpr119 KO小鼠在自由喂養(yǎng)(FF)和食物剝奪(FD)條件下的體重、攝食量、血糖、血脂和GLP-1的變化

 

Gpr119 KO小鼠的能量消耗(圖2C,暗周期)而非呼吸商(2A2B)和運(yùn)動(dòng)活性(2E2F)高于同窩的WT小鼠。因此,Gpr119 KO小鼠即使在攝入相同量的食物時(shí),消耗的能量也高于WT小鼠。此外,利用體重和能量消耗的原始數(shù)據(jù)評(píng)估MMPC能量消耗分析,以檢驗(yàn)增加的能量消耗是否主要影響體重。考慮體重作為協(xié)變量的ANCOVA基因型效應(yīng)無顯著差異(圖2G)。WT小鼠相比,Gpr119 KO小鼠調(diào)整后的能量消耗顯著增加(圖2H),這解釋了Gpr119 KO小鼠與WT小鼠相比相對(duì)瘦弱的表型。


2WTGpr119 KO小鼠在FF條件下的代謝分析

 

2、Gpr119 KO小鼠在食物剝奪后的RF中表現(xiàn)出貪食反應(yīng)

為研究GPR119在代謝應(yīng)激中的作用,將7周齡GPR119 KO小鼠和WT同窩小鼠進(jìn)行24 h的食物剝奪。FD條件下,Gpr119 KO小鼠的體重低于WT小鼠(圖1A)。Gpr119 KO小鼠的體重下降明顯大于WT小鼠(圖1B)。有趣的是,Gpr119 KO小鼠在斷食24小時(shí)后5小時(shí)的食物消耗量高于WT小鼠(圖1D)。此外,Gpr119 KO小鼠的血糖水平往往低于WT小鼠(圖1E)。Gpr119 KO和WT小鼠在不進(jìn)食24小時(shí)后,血漿TG(圖1F)、NEFA(圖1G)和總膽固醇(圖1H)水平無差異。這些結(jié)果表明,Gpr119 KO小鼠在食物剝奪應(yīng)激下表現(xiàn)出貪食反應(yīng)。

 

3Gpr119 KO小鼠在食物剝奪后RF中的餐后間隔時(shí)間較短

根據(jù)圖1中關(guān)于FD型Gpr119 KO小鼠的暴食反應(yīng)的結(jié)果,使用喂養(yǎng)測(cè)量系統(tǒng)觀察WT和Gpr119 KO小鼠在禁食24小時(shí)后RF 3小時(shí)內(nèi)的進(jìn)食模式(圖3)。與圖1D所示的人工攝食量測(cè)量結(jié)果(RF-5 h)一致,與WT小鼠相比,使用該系統(tǒng)測(cè)量的Gpr119 KO小鼠攝食量顯著增加(圖3A)。此外,Gpr119 KO小鼠的進(jìn)餐頻率(圖3C)明顯高于WT小鼠,而Gpr119 KO小鼠和WT小鼠之間的用餐潛伏期(圖3B)和用餐總時(shí)長(圖3D)沒有差異。Gpr119 KO和WT小鼠在第一餐參數(shù)上沒有差異,如餐量(圖3E)、餐時(shí)間(圖3F)、餐后間隔時(shí)間(圖3G)和飽腹率(圖3H)。有趣的是,與WT小鼠相比,Gpr119 KO小鼠的平均餐后間隔時(shí)間(圖3K)和平均飽腹率(圖3L)顯著降低,而非平均餐食量(圖3I)和平均持續(xù)時(shí)間(圖3J)。這些結(jié)果表明,Gpr119的缺失導(dǎo)致RF在食物剝奪后進(jìn)食飽腹感的降低,而且其影響從進(jìn)食開始就延遲的。進(jìn)一步測(cè)量在FD和RF條件下WT和Gpr119 KO小鼠的血漿GLP-1水平(圖1I)。WT和Gpr119 KO小鼠在RF作用下GLP-1水平有升高趨勢(shì),但不同喂養(yǎng)條件之間沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。表明Gpr119的缺失不影響血漿GLP-1水平。此外,驗(yàn)證了食物剝奪對(duì)盲腸Gcg和Gpr119表達(dá)的影響。在WT小鼠的盲腸中,食物剝奪導(dǎo)致Gpr119表達(dá)增加(圖1K),而Gcg表達(dá)減少(圖1J)。在Gpr119 KO小鼠中,Gcg的表達(dá)不受喂養(yǎng)條件的影響;但與WT-FF相比,其表達(dá)水平相對(duì)較低(圖1J)。


3在再喂養(yǎng)條件下Gpr119 KO小鼠表現(xiàn)出增加的食物攝入量和減少的飽腹感

 

4、Gpr119不參與全身OEA引起的飽腹感

為研究GPR119是否參與系統(tǒng)性OEA處理誘導(dǎo)的飽腹感,在FFFD條件下腹腔注射OEA后測(cè)定GPR119 KO小鼠的食物攝入量。在FF條件下,作為OEA處理的結(jié)果, WTGpr119 KO小鼠在暗周期的食物攝入量都顯著減少(圖4A),與對(duì)照小鼠相比。與圖1D一致,Gpr119 KO小鼠在食物剝奪后RF 5小時(shí)內(nèi)的攝食量高于對(duì)照WT小鼠,然而,OEA處理導(dǎo)致WTGpr119 KO小鼠的食物攝入量顯著減少(圖4B)。總之,這些結(jié)果表明,在FFFD條件下,全身OEA誘導(dǎo)飽腹感不需要GPR119的激活。


4腹腔注射OEA可以減少WTGpr119 KO小鼠的食物攝入量

 

5、飼喂可調(diào)動(dòng)腸道內(nèi)容物中的OEA

在這里,作者證實(shí)了Gpr119在胃腸道下部,包括回腸、盲腸和結(jié)腸中有高表達(dá)(圖5A)。作者定量計(jì)算Gpr119高表達(dá)的小鼠盲腸內(nèi)容物中的OEA。結(jié)果顯示,在FF條件下,WT和Gpr119 KO小鼠盲腸內(nèi)容物中OEA含量分別為2.4±0.4 nmol/g和2.3±0.0 nmol/g,且WT和Gpr119 KO小鼠在禁食24 h后,盲腸內(nèi)容物中OEA含量下降(圖5B)。在FF條件下,WT和Gpr119 KO小鼠盲腸內(nèi)容物2-OG水平相似,食物剝奪不影響WT和Gpr119 KO小鼠盲腸2-OG水平(圖5C)。然后,用表達(dá)DOX誘導(dǎo)的人GPR119的HEK293細(xì)胞l檢測(cè)OEA和2-OG的GPR119配體活性。合成的GPR119激動(dòng)劑,Ar231453,使細(xì)胞cAMP水平比對(duì)照提高了7倍(圖5D)。本研究飼糧中OEA的濃度為1.3±0.2 nmol/g,遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于小鼠腸道組織和血漿中的OEA水平。因此,作者預(yù)計(jì)RF會(huì)改變OEA的腔內(nèi)水平,因?yàn)轱嬍持泻蠴EA。分析顯示,在喂食1h或2 h的小鼠中,盲腸和結(jié)腸的腔內(nèi)OEA水平高于十二指腸、空腸和回腸(圖5E)。然而,在食物被剝奪重新喂食2小時(shí)后小鼠盲腸OEA水平不如自由喂食的小鼠高(圖5B)。此外,胃腔內(nèi)OEA水平略高于近端腸,提示近端腸內(nèi)OEA被稀釋和吸收。這些結(jié)果表明,喂養(yǎng)導(dǎo)致大腸內(nèi)OEA水平升高,這可能是由于飼糧OEA積累或腸道菌群產(chǎn)生OEA所致。


5在喂養(yǎng)OEA的遠(yuǎn)端腸腔內(nèi)容物中Gpr119高表達(dá)

 

6、大腸OEA輸注改變飲食模式

接下來,研究輸注到大腸的OEA是否改變小鼠的飲食模式,因?yàn)镺EA在GPR119高表達(dá)的小鼠大腸中增加(圖5)。在24 h的食物剝奪后,通過回腸末端插入導(dǎo)管注入OEA,并監(jiān)測(cè)進(jìn)食行為。在OEA組中,第一次餐后間隔時(shí)間明顯長于對(duì)照組(圖6D)。相比之下,兩組間在潛伏期(圖6A)、第一頓飯的大小(圖6B)或第一頓飯的持續(xù)時(shí)間(圖6C)上沒有差異,導(dǎo)致注入OEA的小鼠第一頓飯的飽腹率增加(圖6E)。此外,小鼠2小時(shí)內(nèi)的飲食模式結(jié)果表明,總攝食量(圖6F)和進(jìn)餐頻率(圖6GB)在注入OEA的小鼠中降低。這些結(jié)果共同表明,飽腹感可由大腸的OEA感應(yīng)引起.


6大腸輸注OEA可誘導(dǎo)小鼠飽食感

 

7、腸道菌群來源的OA產(chǎn)生的OEA調(diào)節(jié)進(jìn)食行為

作者假設(shè)大腸內(nèi)OEA水平升高是因?yàn)槲⑸锖铣闪?/span>OA,雖然也有可能是膳食OEA在大腸內(nèi)內(nèi)容物中積累。為驗(yàn)證這一假設(shè),首先量化注射抗生素一周的小鼠盲腸內(nèi)容物中的OEA水平。與未使用抗生素的小鼠相比,經(jīng)抗生素處理的小鼠的盲腸重量急劇增加,然而,各組之間的糞便中的水分含量沒有差異。因此,分析了使用抗生素的小鼠盲腸中OEA和OA(18:1 FFA)的數(shù)量??股刂委熀?,盲腸OEA水平明顯下降(圖7B),盡管各組之間的18:1水平?jīng)]有明顯差異(圖7A)。這些結(jié)果表明,腸道微生物群會(huì)從到達(dá)大腸的OA中合成OEA。然而,在FF條件下的24小時(shí)內(nèi)(圖7C),或在食物剝奪24小時(shí)后的RF 3小時(shí)內(nèi)(圖7D),抗生素處理并不影響食物攝入。

接下來,研究盲腸中的腸道微生物群是否以O(shè)A為底物生物合成OEA。在小鼠被剝奪食物24小時(shí)后,通過回腸末端的植入式導(dǎo)管將OA直接注入大腸,并在注入OA后2小時(shí)收集的盲腸內(nèi)容物中測(cè)定OEA水平。結(jié)果顯示,輸注OA后,糞便中的OEA水平增加(圖7E),表明大腸中的微生物群從OA中生物合成OEA。因此,接下來調(diào)查從OA中生物合成OEA是否會(huì)誘發(fā)與輸注OEA后觀察到的類似的膳食模式的變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)灌注OA并不影響潛伏期(圖7F)、首餐大?。▓D7H)、首餐持續(xù)時(shí)間(圖7I)、首餐后間隔(圖7J)或首餐飽腹率(圖7K)。然后,分析第二餐的進(jìn)食模式,即在OA輸液后約90-120分鐘內(nèi)發(fā)生的。觀察到OA輸入明顯增加第二餐后的間隔時(shí)間(圖7N)。相比之下,第二餐的大小(圖7L)和第二餐的持續(xù)時(shí)間(圖7M)沒有變化,導(dǎo)致第二飽腹率增加(圖7O)和用餐頻率的減少(圖7G)。綜上所述,這些結(jié)果表明,微生物群以O(shè)A為底物產(chǎn)生OEA,隨后OEA誘導(dǎo)膳食飽腹感。


7由菌群產(chǎn)生的OEA可能改變攝食行為

 

總之,本研究表明,大腸中的GPR119通過感知腸道微生物群產(chǎn)生的OEA誘導(dǎo)飽腹感。GPR119已經(jīng)成為肥胖癥和糖尿病的藥物靶點(diǎn),因?yàn)樗ㄟ^直接作用于胰島β細(xì)胞或通過腸道內(nèi)分泌細(xì)胞分泌的增殖素來刺激胰島素的分泌。因此,旨在加強(qiáng)GPR119激活的策略,如調(diào)節(jié)微生物群組成以增加OEA的產(chǎn)生或抑制OEA的降解,可能有助于在肥胖和其他飲食障礙中誘發(fā)餐食飽腹感。

 

參考文獻(xiàn):

Igarashi Miki., Hayakawa Tetsuhiko., Tanabe Haruka., Watanabe Keita., Nishida Akari., Kimura Ikuo.(2022). Intestinal GPR119 activation by microbiota-derived metabolites impacts feeding behavior and energy metabolism. Mol Metab, undefined(undefined), 101649. doi:10.1016/j.molmet.2022.101649