TBX2通過與CoREST復(fù)合物相互作用,作為腫瘤抑制基因的有效轉(zhuǎn)錄沉默者,以維持乳腺癌的增殖

欄目:最新研究動(dòng)態(tài) 發(fā)布時(shí)間:2023-04-20
TBX2/CoREST靶向NDRG1是通過Sp1招募TBX2到NDRG1啟動(dòng)子上,從而導(dǎo)致NDRG1上調(diào)和癌細(xì)胞增殖減少來實(shí)現(xiàn)的......


TBX2基因位于17q23,常在乳腺腫瘤亞群中過表達(dá)。TBX2是一種抗衰老基因,通過抑制腫瘤抑制基因(TSGs),如NDRG1CST6,促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)和存活。作者前期研究發(fā)現(xiàn)TBX2PRC2復(fù)合體協(xié)同抑制多個(gè)TSGs,PRC2抑制恢復(fù)NDRG1表達(dá)從而抑制細(xì)胞增殖。在這里,作者現(xiàn)在確定CoREST蛋白LSD1ZNF217TBX2的新型互作蛋白。CoREST的遺傳或藥理學(xué)靶向模擬TBX2缺失,誘導(dǎo)NDRG1表達(dá),并在體外和體內(nèi)消除乳腺癌生長(zhǎng)。此外,作者發(fā)現(xiàn)TBX2/CoREST靶向NDRG1是通過Sp1招募TBX2NDRG1啟動(dòng)子上,從而導(dǎo)致NDRG1上調(diào)和癌細(xì)胞增殖減少來實(shí)現(xiàn)的。通過ChIP-seq,作者發(fā)現(xiàn)30 %TBX2結(jié)合啟動(dòng)子與ZNF217共享,并鑒定出TBX2/CoREST抑制的新靶標(biāo);在這些靶點(diǎn)中,lncRNA LINC00111作為細(xì)胞增殖的負(fù)調(diào)控因子??偟膩碚f,這些數(shù)據(jù)表明抑制CoREST蛋白對(duì)TBX2成癮的乳腺腫瘤是一種有前途的治療干預(yù)。本研究于20226月發(fā)表于《Nucleic Acids Res》,IF19.160。

 

技術(shù)路線:


 

主要研究結(jié)果:

1LSD1TBX2相互作用,是乳腺癌細(xì)胞存活所必需的

為確定TBX2是否可以形成除PRC2-like復(fù)合物以外的其他抑制復(fù)合物,作者開展下面的研究。首先,在TBX2依賴的MCF7和T47D乳腺癌模型中,使用56個(gè)已知表觀遺傳修飾的核糖核酸內(nèi)切酶siRNA(esiRNA)庫(kù)進(jìn)行活性篩選;任何導(dǎo)致細(xì)胞活力降低的“hits”都可以代表TBX2潛在的功能互作蛋白(圖1A)。取4個(gè)“hits”(Hdac7、Sirtuin-3(SIRT3)、LSD1和Jumonji Domain-Containing 2B(JMJD2B)/KDM4B),對(duì)其在兩種細(xì)胞系的活力進(jìn)行下游驗(yàn)證。用兩個(gè)獨(dú)立的siRNA敲低每一個(gè)候選基因,48 h后的細(xì)胞活力實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),SIRT3和LSD1對(duì)MCF7細(xì)胞活力明顯增強(qiáng),但在MCF10A正常乳腺細(xì)胞中沒有(圖1B-C)。然而,在這些短期敲低中,LSD1敲低對(duì)TBX2靶標(biāo)CST6的mRNA上調(diào)表現(xiàn)出最顯著和可重復(fù)的效應(yīng),與CST6通常抑制的酶Legumain活性降低相一致(圖1D-E)。這表明LSD1可能是TBX2可能的互作伙伴。免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)證實(shí),在MCF7和T47D模型中,TBX2和LSD1之間存在物理相互作用(圖1F)。這些數(shù)據(jù)表明TBX2可能與多種表觀遺傳調(diào)控因子相互作用,抑制LSD1可作為靶向TBX2依賴性乳腺癌的可行策略。

作者下面確定TBX2-LSD1相互作用是否存在轉(zhuǎn)錄復(fù)合體中轉(zhuǎn)錄因子與其他染色質(zhì)調(diào)控蛋白的相互作用影響蛋白的穩(wěn)定性。首先,靶向TBX2的siRNA處理MCF7細(xì)胞72h后,細(xì)胞增殖能力降低,同時(shí)伴隨著靶基因NDRG1和CST6的上調(diào);然而,Western blot分析顯示這獨(dú)立于對(duì)LSD1蛋白水平的影響(圖2A)。同樣地,用兩個(gè)獨(dú)立的siRNA敲低LSD1,TBX2的敲低效果類似,但TBX2的RNA和蛋白沒有相應(yīng)的減少(圖2C)??寺⌒纬蓪?shí)驗(yàn)也證實(shí),LSD1和TBX2敲低對(duì)長(zhǎng)期生存的影響相當(dāng),克隆數(shù)顯著減少(圖2B-D)。這些現(xiàn)象在第二個(gè)細(xì)胞系(T47D)中也是一致的,敲低TBX2或LSD1導(dǎo)致類似的細(xì)胞增殖減少和NDRG1/CST6上調(diào),而在蛋白水平上不影響彼此的穩(wěn)定性(圖2E)。結(jié)晶紫生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)再次證實(shí)TBX2和LSD1是T47D細(xì)胞克隆存活所必需的(圖2F)。綜合這些數(shù)據(jù)表明,雖然TBX2和LSD1對(duì)蛋白穩(wěn)定性沒有相互要求,但兩者的相互作用可能對(duì)抑制TBX2靶基因和維持乳腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)具有重要意義。


1 LSD1TBX2相互作用。


2 LSD1敲低TBX2表型缺失。

 

2、變構(gòu)LSD1抑制劑SP-2509在體內(nèi)抑制TBX2靶點(diǎn)并抑制雌激素依賴的乳腺腫瘤生長(zhǎng)

在確定LSD1TBX2的一個(gè)新的細(xì)胞增殖所需的相互作用因子后,作者通過檢測(cè)LSD1抑制劑SP-2509RN-1GSK-LSD1來研究這種依賴性是否可以被藥理學(xué)靶向。首先,MCF7T47D細(xì)胞暴露于濃度遞增的LSD1抑制劑(圖3A)。在測(cè)試的3個(gè)抑制劑中,只有SP-2509顯示出降低細(xì)胞增殖的效果,72 h時(shí)對(duì)MCF7IC50250 nM,對(duì)T47DIC501 M。兩株細(xì)胞均對(duì)RN-1GSK-LSD1的作用高度耐藥,在最大20 M劑量下無法達(dá)到IC50;事實(shí)上,GSKLSD1確實(shí)促進(jìn)MCF7(可能是由于脫靶效應(yīng))的生長(zhǎng)。Western blot結(jié)果顯示,IC50劑量的SP-2509處理后,NDRG1的表達(dá)顯著上調(diào),而20 M RN-120 M GSK-LSD1則無此作用。與作者之前觀察到的LSD1敲低后TBX2的表達(dá)情況類似,SP-2509干擾LSD1的活性后TBX2的蛋白水平?jīng)]有受到影響。在MCF7細(xì)胞中,NDRG1的上調(diào)與H3K4二甲基化(H3K4me2)的整體增加相關(guān),而在T47D細(xì)胞中,NDRG1的上調(diào)與該組蛋白標(biāo)記不相關(guān),表明H3K4me2的整體變化是SP-2509處理的間接效應(yīng)(圖3B)。無論H3K4me2水平如何,用SP-2509 IC50處理兩種細(xì)胞系均導(dǎo)致靶基因NDRG1CST6的轉(zhuǎn)錄顯著上調(diào),而RN-1GSK-LSD120M時(shí)幾乎沒有影響(圖3C-D)。相應(yīng)地,SP-2509處理導(dǎo)致CST6靶點(diǎn)Legumain的活性顯著降低(圖3E)。接下來,作者利用Tet-off誘導(dǎo)模型探討SP-2509是否可以發(fā)揮TBX2依賴的表型;該基因表達(dá)一個(gè)顯性負(fù)調(diào)控TBX2蛋白(DN-TBX2),由包含完整T結(jié)構(gòu)域的1-301個(gè)氨基酸組成,但缺少抑制結(jié)構(gòu)域所在的302-701個(gè)氨基酸。有趣的是,SP-2509的抗增殖作用在誘導(dǎo)表達(dá)截短型TBX2MCF7細(xì)胞中更加明顯(圖3F),同時(shí)伴隨著靶標(biāo)NDRG1CST6的上調(diào),顯著高于單獨(dú)處理組(圖3F)。值得注意的是,DN-TBX2對(duì)LSD1蛋白表達(dá)的影響可以忽略不計(jì),這表明這種對(duì)SP-2509的敏感性增強(qiáng)不是由于藥物靶標(biāo)的下調(diào)。為確定SP-2509是否能在體內(nèi)抑制乳腺腫瘤的生長(zhǎng),用MCF7細(xì)胞移植雌激素補(bǔ)充的小鼠,用40 mg/kgSP-2509或溶劑處理4周(圖3G)。終點(diǎn)免疫組織化學(xué)染色發(fā)現(xiàn),SP-2509處理的腫瘤組織中增殖標(biāo)志物Ki-67的表達(dá)約為溶劑對(duì)照組的一半(圖3H)??偟膩碚f,這些體外和體內(nèi)的數(shù)據(jù)表明,SP-2509特異性靶向LSD1H3變構(gòu)位點(diǎn),可以導(dǎo)致TSGs的有效上調(diào),并可能是用于開發(fā)乳腺癌中的TBX2依賴性的一個(gè)可行的治療方案。


3 一種變構(gòu)LSD1抑制劑增強(qiáng)tbx2抑制基因的表達(dá),并在體內(nèi)阻止乳腺腫瘤的生長(zhǎng)。

 

3TBX2CoREST復(fù)合體的組件相互作用

對(duì)TBX2敲低后上調(diào)的轉(zhuǎn)錄本進(jìn)行ChEA富集分析,發(fā)現(xiàn)ZNF217是第二顯著的TF結(jié)合位點(diǎn)(圖4A)。因此,作者推測(cè)TBX2可能與ZNF217相互作用,除LSD1外,還可能與CoREST復(fù)合體的其他成員相互作用。因此,從MCF7BT474細(xì)胞提取物中免疫沉淀ZNF217,證實(shí)了除CoREST組分LSD1HDAC1外,還與TBX2存在物理相互作用(圖4B)。這表現(xiàn)在TBX2的下拉互作中,表現(xiàn)為與ZNF217、LSD1HDAC1的正向互作(圖4C),重要的是,這些數(shù)據(jù)再現(xiàn)之前的發(fā)現(xiàn),TBX2可以與HDAC1相互作用,這被證明依賴于TBX2C端。

通過兩個(gè)獨(dú)立的ZNF217 siRNA序列處理TBX2依賴的細(xì)胞,評(píng)估ZNF217對(duì)TBX2依賴的細(xì)胞存活的重要性,這導(dǎo)致目標(biāo)NDRG1CST6的生長(zhǎng)顯著降低和轉(zhuǎn)錄上調(diào)(圖4D)。與LSD1一樣,ZNF217敲低后NDRG1的上調(diào)與TBX2蛋白表達(dá)的變化無關(guān),反之亦然(圖4E)。在BT474T47D乳腺細(xì)胞系中進(jìn)一步證實(shí)了這種依賴性,其中ZNF217的敲低導(dǎo)致NDRG1顯著上調(diào)并顯著降低克隆形成率(圖4F)。

為了進(jìn)一步評(píng)估CoREST依賴性,通過增加抑制劑MS-275(恩替諾特)的劑量處理表達(dá)TBX2的細(xì)胞72 h,證實(shí)其對(duì)IHDACs的敏感性,其在MCF7T47D細(xì)胞中的IC50分別為1.5 M0.5 M。由于多個(gè)CoREST相關(guān)蛋白的敲除可以解除對(duì)TBX2靶點(diǎn)的抑制,因此提出同時(shí)抑制多個(gè)復(fù)合物成員應(yīng)該導(dǎo)致明顯的表型。因此,作者發(fā)現(xiàn)低劑量的SP-2509和恩替諾特(IC50以下)對(duì)NDRG1/CST6的生長(zhǎng)抑制和轉(zhuǎn)錄上調(diào)作用明顯大于單藥處理(圖4G)。這些結(jié)果表明,TBX2CoREST蛋白LSD1ZNF217HDAC1之間的相互作用和協(xié)調(diào)活性可能是抑制TSGs促進(jìn)乳腺腫瘤存活所必需的。


4 TBX2CoREST抑制復(fù)合物的組分相互作用。

 

4、TBX2ZNF217顯示出截然不同和重疊的全局DNA結(jié)合譜

基于作者的證據(jù),TBX2CoREST因子共同存在于抑制復(fù)合體中,作者進(jìn)一步將作者的內(nèi)部TBX2數(shù)據(jù)與公開的MCF7進(jìn)行了比較該復(fù)合物中關(guān)鍵蛋白的ChIP-seq。由于缺乏高質(zhì)量的LSD1公共數(shù)據(jù)以及作者無法通過甲醛方案實(shí)現(xiàn)LSD1富集,作者利用ZNF217 ENCODE ChIP-seq數(shù)據(jù)來代表潛在的CoREST靶向區(qū)域。作者發(fā)現(xiàn)30 %TBX2結(jié)合位點(diǎn)與ZNF217峰中心重疊,這些峰的平均信號(hào)富集度在兩種蛋白中高度相似(圖5A)。與ZNF217重疊的TBX2峰主要見于啟動(dòng)子區(qū)域(圖5B),激酶富集分析顯示其富集于PDGFRA下游靶基因(圖5C)。有趣的是,這些TBX2/ZNF217重疊峰對(duì)之前發(fā)現(xiàn)的CTCFNF-Y基序缺乏富集,而對(duì)Fos/JunAP-1)、THAP11、GABPASp1共有序列顯示顯著富集(圖5D)。相反,ZNF217信號(hào)缺失的其余TBX2位點(diǎn)富集在Sp1CTCF、NF-YCREM基序,而AP-1、THAP11GABPA基序沒有富集;綜上表明ZNF217影響TBX2AP-1、THAP11GABPA位點(diǎn)的定位,而ZNF217本身不經(jīng)常發(fā)生在TBX2結(jié)合的NF-Y、CTCFCREM位點(diǎn)。相應(yīng)地,對(duì)TBX2信號(hào)缺失的ZNF217結(jié)合位點(diǎn)分析發(fā)現(xiàn),THAP11、AP-1、GABPACTCF基序顯著出現(xiàn),而NF-YCREM序列沒有富集(圖5D)。作者進(jìn)一步檢測(cè)TBX2ZNF217的結(jié)合位點(diǎn),其中包括CoREST復(fù)合物關(guān)鍵組分RCOR1ENCODE公共ChIP-seq數(shù)據(jù)。三個(gè)蛋白均富集的靶基因可能代表TBX2-CoREST抑制基因。雖然部分TBX2/ZNF217共享區(qū)域顯示重疊的RCOR1信號(hào),但在ZNF217結(jié)合(圖5E)的剩余TBX2位點(diǎn)中沒有觀察到中心RCOR1富集。這些數(shù)據(jù)突出表明ZNF217對(duì)于RCOR1定位到TBX2靶區(qū)域是必不可少的,并且發(fā)現(xiàn)了一組TBX2可能與CoREST蛋白相互作用以實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)錄抑制的目標(biāo)啟動(dòng)子。ZNF217對(duì)TBX2-CoREST抑制的重要性也可能解釋為什么SP-2509破壞復(fù)合物中ZNF217的相互作用可以有效地去抑制TSGs和抑制乳腺癌細(xì)胞增殖。


5 ZNF217與乳腺癌細(xì)胞中三分之一的TBX2結(jié)合位點(diǎn)重疊。

 

5Sp1對(duì)于TBX2介導(dǎo)的NDRG1抑制至關(guān)重要

鑒于MCF7 ChIP-seqTBX2結(jié)合位點(diǎn)最富集于Sp1基序,作者推測(cè)Sp1可能與TBX2介導(dǎo)的基因抑制有關(guān)。免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)證實(shí)TBX2Sp1存在相互作用(圖6A)。接下來,作者檢測(cè)NDRG1位點(diǎn)對(duì)Sp1識(shí)別位點(diǎn)的影響(圖6B)。與其他在電子數(shù)據(jù)庫(kù)中鑒定的TBX2/CoREST靶點(diǎn)相比,NDRG1位點(diǎn)的TBX2、ZNF217RCOR1結(jié)合位點(diǎn)的排列遵循非典型模式;而在啟動(dòng)子TSS處存在明顯的TBX2RCOR1峰,該區(qū)域缺少一個(gè)較強(qiáng)的ZNF217峰。相反,ZNF217結(jié)合被發(fā)現(xiàn)富集在NDRG1位點(diǎn)3 '端內(nèi)含子區(qū)域,與RCOR1共定位。重要的是,位于內(nèi)含子10的區(qū)域被歸類為“基因內(nèi)增強(qiáng)子”,在GeneHancer雙精英數(shù)據(jù)庫(kù)中被編目以靶向NDRG1 TSS(圖6B)。內(nèi)含子10作為NDRG1的內(nèi)部增強(qiáng)子的證據(jù)被公開的MCF7數(shù)據(jù)進(jìn)一步證實(shí),表明該區(qū)域在3D實(shí)驗(yàn)中與啟動(dòng)子存在物理相互作用;啟動(dòng)子和內(nèi)含子也被富集到組蛋白修飾H3K27Ac和組蛋白H34-甲基化,活性增強(qiáng)子的標(biāo)志。因此,NDRG1啟動(dòng)子上缺乏強(qiáng)的ZNF217信號(hào)可以通過染色質(zhì)環(huán)化來解釋,從而影響蛋白質(zhì)從一個(gè)復(fù)合物固定到兩個(gè)明顯不同的DNA區(qū)域。有趣的是,主上皮因子GRHL2CCNGTTNNNCNAG)的基序在NDRG1啟動(dòng)子和第10內(nèi)含子的ChIP峰中心都存在(圖6B),而完全保守Sp1序列(GGGGCGGGGC)特異于TBX2峰的中心啟動(dòng)子處。鑒于之前的研究發(fā)現(xiàn)GRHL2Sp1分別是參與ZNF217TBX2MCF7細(xì)胞中全局結(jié)合的關(guān)鍵基序,這些觀察結(jié)果是擬合的(圖5D)。有趣的是,TBX2GRHL2存在物理互作(圖6C)。然而,在TBX2依賴的細(xì)胞系中,單獨(dú)敲低Sp1被認(rèn)為足以使NDRG1上調(diào)(圖6D),而該蛋白的丟失顯著降低了長(zhǎng)期生存(圖6E)。匹配mRNA的分析也證實(shí)Sp1缺失后NDRG1的上調(diào)發(fā)生在轉(zhuǎn)錄水平(圖6F);因此,這些數(shù)據(jù)表明Sp1可能對(duì)NDRG1的抑制和維持細(xì)胞增殖有重要作用。對(duì)作者的TBX2 ChIP-seq數(shù)據(jù)進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn),Sp1基序主要位于TBX2峰頂100bp內(nèi),表明這兩個(gè)因子之間存在協(xié)同或競(jìng)爭(zhēng)的DNA結(jié)合(圖6G)。在NDRG1位點(diǎn),ChIP PCR顯示Sp1敲低后TBX2與啟動(dòng)子/ TSS區(qū)域的結(jié)合明顯減弱(圖6H)。作者觀察到siRNA敲低NDRG1部分挽救TBX2ZNF217敲低的抗增殖作用(圖6I-J)。這些結(jié)果表明TBX2-CoREST復(fù)合物對(duì)NDRG1的轉(zhuǎn)錄抑制是通過Sp1招募TBX2NDRG1啟動(dòng)子上實(shí)現(xiàn)的。雖然NDRG1TBX2/CoREST缺失后發(fā)揮抑癌作用,但其他一些靶基因(潛在的新型TSGs)可能參與了這一表型,因此需要進(jìn)一步研究。


6 Sp1通過招募TBX2NDRG1啟動(dòng)子來抑制TSG NDRG1

 

6、LINC00111TBX2-CoREST抑制,在乳腺癌細(xì)胞中表現(xiàn)出腫瘤抑制活性

鑒于ZNF217MCF7 ChIP-seq中占據(jù)了大量的TBX2結(jié)合位點(diǎn),作者確定了這些區(qū)域中的哪些區(qū)域代表了TBX2-CoREST抑制基因,這些基因可能具有腫瘤抑制功能。在包含RCOR1TBX2/ZNF217結(jié)合區(qū)域的子集中,作者篩選出7個(gè)啟動(dòng)子,它們的轉(zhuǎn)錄本因TBX2ZNF217功能的喪失而持續(xù)上調(diào);其中6個(gè)基因?yàn)榈鞍拙幋a(CELSR2、CORO2A、CTNND2GOLT1A、KLHL20PTK6),1個(gè)基因?yàn)殚L(zhǎng)鏈非編碼RNA產(chǎn)物(LINC00111)(圖7A)。這些基因在TF結(jié)合位點(diǎn)內(nèi)都至少含有一個(gè)之前發(fā)現(xiàn)的顯著性基序(圖5D)。LINC00111啟動(dòng)子與其他區(qū)域不同,TBX2峰含有CREM基序,在TBX2結(jié)合位點(diǎn)整體中較少出現(xiàn)(圖7A)。作者發(fā)現(xiàn)這7個(gè)基因都受到TBX2-CoREST的轉(zhuǎn)錄抑制,用TBX2 siRNAZNF217/LSD1抑制劑SP-2509處理后,相關(guān)的RNA顯著上調(diào)。LINC00111被發(fā)現(xiàn)是上調(diào)最強(qiáng)烈的轉(zhuǎn)錄本,其誘導(dǎo)倍數(shù)與NDRG1相當(dāng)(圖7B-C)。

作者為確定TBX2-CoREST抑制靶點(diǎn)是否在細(xì)胞生長(zhǎng)和存活中發(fā)揮作用,在缺乏和存在LINC00111 siRNA的情況下敲低TBX2,比較對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響(圖7D)。結(jié)果發(fā)現(xiàn),LINC00111 siRNA處理顯著挽救TBX2 siRNA以及HP1KAP1敲低的抗增殖作用(圖7D)。有趣的是,單獨(dú)使用LINC00111 siRNA處理導(dǎo)致TBX2蛋白顯著上調(diào),這自然與TBX2 siRNA的作用相反(圖7D,1);這暗示LINC00111本身可能作為TBX2的阻遏物。此外,LINC00111 siRNA基底降低了促衰老因子細(xì)胞周期蛋白激酶抑制因子P21Waf1/Cip1的蛋白水平,同時(shí)阻止了TBX2 siRNA對(duì)細(xì)胞周期蛋白激酶抑制因子P21Waf1/Cip1的上調(diào)作用(圖7D5、6)。LINC00111 siRNA不影響HP1 /KAP1的蛋白表達(dá)(圖7D,23);然而,通過LINC00111 siRNA處理(圖7D,56),HP1/KAP1敲低對(duì)細(xì)胞周期蛋白激酶抑制因子P21Waf1/Cip1的上調(diào)作用大大降低。相反,LINC00111 siRNA不能挽救EZH2敲低的抗增殖作用,也不能導(dǎo)致細(xì)胞周期蛋白激酶抑制因子P21Waf1/Cip1的上調(diào)(圖7D,45、6)。這些數(shù)據(jù)表明LINC00111在與細(xì)胞周期蛋白激酶抑制因子P21Waf1/Cip1誘導(dǎo)相關(guān)的生長(zhǎng)停滯中發(fā)揮重要作用。

為進(jìn)一步證實(shí)LINC00111在生長(zhǎng)阻滯中的作用,在MCF7MDA-MB-361細(xì)胞中重復(fù)實(shí)驗(yàn),其中TBX2LINC00111 siRNA存在和不存在的情況下被敲低。RT-qPCR證實(shí)TBX2缺失后LINC00111表達(dá)上調(diào),LINC00111 siRNA干擾后LINC00111表達(dá)下調(diào)。如前所述,LINC00111敲低引起TBX2本身的上調(diào)(圖7E-F)。在這兩種細(xì)胞系中,LINC00111敲低阻止了TBX2 siRNA對(duì)細(xì)胞周期蛋白激酶抑制因子P21Waf1/Cip1的上調(diào),并部分挽救了增殖標(biāo)志物CDK1的丟失(圖7F)。在長(zhǎng)期實(shí)驗(yàn)中,LINC00111敲低也顯著降低了TBX2 siRNA對(duì)克隆形成的不利影響(圖7G)。總的來說,這些結(jié)果表明LINC00111通過調(diào)節(jié)TBX2和細(xì)胞周期蛋白激酶抑制因子P21Waf1/Cip1的表達(dá)而具有腫瘤抑制特性,因此當(dāng)被TBX2-CoREST復(fù)合物靶向抑制時(shí),對(duì)癌細(xì)胞存活具有重要的影響。


7 LINC00111TBX2-CoREST的轉(zhuǎn)錄抑制靶點(diǎn),具有抑瘤活性。

 

結(jié)論

總之,作者鑒定了一個(gè)由TBX2抑癌基因形成的新的轉(zhuǎn)錄復(fù)合物。TBX2對(duì)其他轉(zhuǎn)錄因子的重新配置以及與多個(gè)抑制復(fù)合物的界面的適應(yīng)性使其成為一個(gè)非常強(qiáng)大的致癌基因。

 

8 TBX2-CoREST抑制NDRG1靶基因的機(jī)制。

 

參考文獻(xiàn)

McIntyre AJ, Angel CZ, Smith JS, Templeman A, Beattie K, Beattie S, Ormrod A, Devlin E, McGreevy C, Bothwell C, Eddie SL, Buckley NE, Williams R, Mullan PB. TBX2 acts as a potent transcriptional silencer of tumour suppressor genes through interaction with the CoREST complex to sustain the proliferation of breast cancers. Nucleic Acids Res;5011:6154-6173. doi: 10.1093/nar/gkac494.