單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組學(xué)揭示了 橫紋肌肉瘤中的免疫抑制和與患者預(yù)后相關(guān)的細(xì)胞狀態(tài)

      橫紋肌肉瘤（RMS）是一種起源于間充質(zhì)的軟組織惡性腫瘤，被認(rèn)為是肌原性分化異常的結(jié)果。盡管有密集的治療方案，高?；颊叩念A(yù)后仍然令人沮喪。RMS的細(xì)胞分化狀態(tài)及其與患者預(yù)后的關(guān)系在很大程度上仍然不清楚。在這項(xiàng)研究中，作者使用單細(xì)胞mRNA測序技術(shù)生成了橫紋肌肉瘤的轉(zhuǎn)錄組圖譜。對(duì)橫紋肌肉瘤腫瘤微環(huán)境的分析顯示其存在免疫抑制的跡象。作者還發(fā)現(xiàn)，在更具侵襲性的融合陽性（FP）RMS亞型中，NECTIN3和TIGIT之間可能存在相互作用，這可能是腫瘤引起T細(xì)胞功能障礙的潛在原因。在惡性橫紋肌肉瘤細(xì)胞中，作者定義了反映正常肌原性分化的轉(zhuǎn)錄程序，并且證明這些細(xì)胞分化狀態(tài)對(duì)FP RMS和更不具侵襲性的融合陰性亞型的患者預(yù)后有預(yù)測性。作者的研究揭示了針對(duì)橫紋肌肉瘤免疫微環(huán)境的治療潛力，并建議評(píng)估腫瘤分化狀態(tài)可以實(shí)現(xiàn)更精細(xì)的風(fēng)險(xiǎn)分層。
      該研究于2023年5月發(fā)表發(fā)表在《Nature communications》，IF：17.694。

      技術(shù)路線：

      實(shí)驗(yàn)方法：單細(xì)胞RNA測序、免疫組織化學(xué)和H&E染色、RNA熒光原位雜交、細(xì)胞分類、免疫微環(huán)境分析、免疫細(xì)胞類型鑒定、GSEA、配體-受體相互作用分析、Logistic回歸分析、基因集富集分析、差異化軌跡建模、轉(zhuǎn)錄因子活性分析、生存分析。

1、橫紋肌肉瘤（RMS）腫瘤的單細(xì)胞圖譜
      作者采用基于板的單細(xì)胞mRNA測序（SORT-seq）協(xié)議，對(duì)活體冷凍原發(fā)RMS腫瘤標(biāo)本和最近建立的患者來源的腫瘤器官模型進(jìn)行了操作（圖1a）。選擇基于板的方法可以從低活性的原始樣本或樣本物質(zhì)有限的情況下生成高質(zhì)量的單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組。從作者的27個(gè)RMS樣本（包括19個(gè)原發(fā)樣本和8個(gè)先前建立的腫瘤器官樣模型），涵蓋主要的分子和組織亞型（FP，F(xiàn)N，肺泡和胚胎，圖1b、c），作者獲得了10216個(gè)通過質(zhì)量閾值的高質(zhì)量單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組。
      為了區(qū)分原發(fā)樣本中的RMS細(xì)胞和組成腫瘤微環(huán)境的非惡性細(xì)胞類型，作者采用了兩種互補(bǔ)的方法。首先，使用SingleR評(píng)估了每個(gè)單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組與來自健康細(xì)胞類型和橫紋肌肉瘤的批量轉(zhuǎn)錄組的參考集之間的相似性。通過對(duì)相似性得分進(jìn)行聚類，可以明確區(qū)分與批量橫紋肌肉瘤具有高相似性的細(xì)胞（惡性細(xì)胞）和類似于多種免疫或基質(zhì)細(xì)胞類型的細(xì)胞。其次，對(duì)每個(gè)腫瘤基礎(chǔ)上的單細(xì)胞拷貝數(shù)變異（CNV）進(jìn)行推斷和聚類。在所有腫瘤中，可以區(qū)分出具有一致的全染色體和亞染色體CNV的細(xì)胞（惡性細(xì)胞）和那些看起來是拷貝中性的細(xì)胞?？傮w而言，單細(xì)胞來源的CNV圖譜與大量腫瘤樣本的全基因組測序結(jié)果高度相似。使用兩種方法分類為“惡性”或“正?！钡募?xì)胞被保留，而分類不一致的細(xì)胞則被排除在進(jìn)一步分析之外。每個(gè)原發(fā)樣本中的惡性細(xì)胞百分比的中位數(shù)為56％，盡管變化很大（2％-97％），但在分子亞型之間沒有顯著差異（圖1f）。如預(yù)期的一致，疑似惡性細(xì)胞表達(dá)DES、MYOD1和MYOG等典型的橫紋肌肉瘤標(biāo)記基因（圖1e）。然后，使用SingleR細(xì)胞類型相似性得分和已知標(biāo)記基因的表達(dá)來確定非惡性細(xì)胞的身份（圖1e）。與惡性細(xì)胞的整體百分比一樣，每種非惡性細(xì)胞類型的比例在腫瘤之間變化很大，但根據(jù)融合狀態(tài)沒有顯著差異（圖1f）。
      將分類的原發(fā)性單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組在均勻流形逼近與投影（UMAP）空間中進(jìn)行投影顯示，腫瘤間的異質(zhì)性和分子亞型分類（FN或FP）驅(qū)動(dòng)了惡性細(xì)胞的聚類，而非惡性細(xì)胞則按細(xì)胞類型進(jìn)行聚類（圖1d），這與先前對(duì)其他腫瘤實(shí)體的描述相符。基于分子亞型和腫瘤間異質(zhì)性進(jìn)行的聚類也觀察到了腫瘤器官樣細(xì)胞中的情況，支持在體外擴(kuò)增后保留了亞型特異性轉(zhuǎn)錄組差異的存在。

2、RMS微環(huán)境的特征揭示了一般和亞型特異性的免疫功能障礙 
      了探索腫瘤浸潤性免疫細(xì)胞的組成和功能特征，對(duì)原始RMS樣本的髓系和T/NK亞群進(jìn)行了基于圖的聚類（圖2a、e）。對(duì)髓系聚類中標(biāo)記基因的表達(dá)進(jìn)行檢查，發(fā)現(xiàn)存在未分化（M0）和分化（Mq）巨噬細(xì)胞，以及傳統(tǒng)型（cDC）和漿細(xì)胞型（pDC）樹突狀細(xì)胞（圖2b）。對(duì)分化巨噬細(xì)胞進(jìn)行M1/M2特異性基因特征進(jìn)行評(píng)分，顯示它們主要處于M2極化狀態(tài)（圖2c），它與幾種促腫瘤功能相關(guān)，包括抑制炎癥和促進(jìn)血管生成。原發(fā)腫瘤組織的免疫熒光(IF)顯微鏡顯示CD206+和CD163+細(xì)胞在多個(gè)患者樣本中的滲透(圖2d)支持這一發(fā)現(xiàn)。
      在T/NK細(xì)胞聚類中，可以區(qū)分出幾個(gè)亞型，包括原始和gamma delta（GD）T細(xì)胞、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Tregs）、細(xì)胞毒性（CD8 +）T細(xì)胞和多個(gè)亞型的CD4 + T輔助細(xì)胞（IL7R +和ISG +）（圖2f）
      基因集富集分析（GSEA）比較RMS亞型之間的CD8 + T細(xì)胞表明，F(xiàn)P樣本中的功能障礙更為普遍，這些樣本富集了與PD-1信號(hào)傳導(dǎo)、氧化磷酸化和T細(xì)胞衰竭相關(guān)的基因集，而來自FN腫瘤的細(xì)胞富集了干擾素應(yīng)答和刺激特征（圖2g）。為了定義調(diào)節(jié)免疫功能的潛在細(xì)胞間相互作用，作者使用CellChat模擬TME內(nèi)惡性細(xì)胞、每種亞型和細(xì)胞類型之間的配體-受體相互作用。
      該分析強(qiáng)調(diào)了FP腫瘤特有的一種可能存在的相互作用，即惡性細(xì)胞表達(dá)的NECTIN3與Tregs和CD8 + T細(xì)胞上的TIGIT受體之間的相互作用。這種相互作用的特異性是由于FP腫瘤細(xì)胞中NECTIN3的顯著高表達(dá)，而TIGIT在Tregs和CD8+T細(xì)胞中的表達(dá)在不同亞型之間是相似的。支持這一發(fā)現(xiàn)的是，原發(fā)性腫瘤組織的免疫熒光顯微鏡檢查顯示兩個(gè)亞型中都存在TIGIT陽性細(xì)胞，并且FP RMS中觀察到一致更普遍的NECTIN3染色模式（圖2h）。綜上所述，對(duì)RMS中的腫瘤微環(huán)境的分析突出了普遍的免疫功能障礙，如M2極化的巨噬細(xì)胞的普遍存在，以及FP特異性的T細(xì)胞衰竭表型，這部分可能受到NECTIN3和TIGIT之間的相互作用的調(diào)節(jié)。

3、RMS中的惡性細(xì)胞狀態(tài)反映了正常肌肉發(fā)育過程的特征
      雖然有人提出RMS腫瘤是由于肌肉發(fā)育出現(xiàn)問題而產(chǎn)生的，但RMS確切的發(fā)育起源仍然是一個(gè)積極研究的領(lǐng)域。為了將原發(fā)性RMS腫瘤細(xì)胞置于正常肌肉發(fā)育的背景下，作者訓(xùn)練了一系列Logistic回歸模型，來預(yù)測惡性單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組與最近發(fā)表的人類胎兒和出生后肌肉發(fā)育單細(xì)胞圖譜定義的主要細(xì)胞類型的相似性。這項(xiàng)分析顯示，平均而言，F(xiàn)N RMS細(xì)胞類似于肌肉前體細(xì)胞和肌肉間充質(zhì)細(xì)胞，而FP細(xì)胞與成肌細(xì)胞最接近。這符合FN腫瘤通常呈現(xiàn)出未分化的“胚胎型”組織學(xué)特征的概念，而FP則更廣泛地表達(dá)了負(fù)責(zé)協(xié)調(diào)終末分化的關(guān)鍵肌肉調(diào)控因子MYOD1和MYOG6（圖1b、c）。然而，當(dāng)以單細(xì)胞分辨率進(jìn)行分析時(shí)，作者發(fā)現(xiàn)每個(gè)亞型和腫瘤的單個(gè)細(xì)胞都覆蓋了肌肉發(fā)育的各個(gè)階段，表明在細(xì)胞分化狀態(tài)中存在大規(guī)模的腫瘤內(nèi)和腫瘤間異質(zhì)性。

4、FN RMS中的NMF定義的分化軌跡反映了早期肌肉發(fā)育
      為了探索異質(zhì)性的潛在來源，在作者的RMS scRNAseq隊(duì)列中，針對(duì)每個(gè)分子亞型獨(dú)立地應(yīng)用了非負(fù)矩陣分解（NMF）來定義惡性細(xì)胞中活躍的基礎(chǔ)轉(zhuǎn)錄程序。在FN RMS樣本中，這種分析揭示了三個(gè)高度相關(guān)的轉(zhuǎn)錄程序簇，作者將其合并為三個(gè)元程序（圖3a-左側(cè)）。值得注意的是，構(gòu)成每個(gè)元程序的基礎(chǔ)程序來自多個(gè)腫瘤樣本，這表明聚類不是由腫瘤間的差異驅(qū)動(dòng)的。為了解釋每個(gè)元程序的生物學(xué)相關(guān)性，作者評(píng)估了其具有最高權(quán)重的基因的表達(dá)（圖3a-右側(cè)）。第一個(gè)程序被稱為“類間質(zhì)樣”程序，富含與細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）組織相關(guān)的基因，包括FN1、TGFBI和幾個(gè)編碼膠原蛋白的基因等。第二個(gè)程序被稱為“前體樣”程序，包括在早期肌肉發(fā)育中表達(dá)的基因，例如FGFR4和GPC3，以及增殖標(biāo)記物，包括MKI67和TOP2A。正如所暗示的那樣，具有高表達(dá)前體樣程序基因的細(xì)胞被推測具有高細(xì)胞周期活性（圖3a-右側(cè)面板）。最后，“肌母細(xì)胞樣”程序由參與調(diào)控末端肌肉分化的基因組成，包括MYOD1、MYOG、MEF2C和CDH15，以及編碼終端分化紋狀肌的結(jié)構(gòu)和功能組分的基因，例如TTN和CKM。對(duì)FN細(xì)胞進(jìn)行每個(gè)元程序的評(píng)分顯示，肌母細(xì)胞樣和類間質(zhì)樣程序的表達(dá)是互斥的，而高度增殖的前體樣狀態(tài)的表達(dá)僅限于得分低于類間質(zhì)樣和肌母細(xì)胞樣程序的細(xì)胞（圖3b）。這些關(guān)聯(lián)結(jié)果在來自最近發(fā)表的獨(dú)立單核RNA-seq隊(duì)列的RMS腫瘤數(shù)據(jù)集中得到了驗(yàn)證。
      然后，使用元程序評(píng)分來定義每個(gè)細(xì)胞的離散“狀態(tài)”。這種分析揭示了細(xì)胞狀態(tài)在腫瘤之間的分布存在很大的變異性（圖3c）。有趣的是，某些腫瘤（例如RMS012和RMS000HEI）主要由類間質(zhì)樣細(xì)胞組成，而其他腫瘤（例如RMS444和RMS000FWE）幾乎完全包含前體樣細(xì)胞。利用RNA熒光原位雜交驗(yàn)證了每個(gè)細(xì)胞狀態(tài)的存在以及前體樣和類間質(zhì)樣狀態(tài)在個(gè)體腫瘤內(nèi)的分布（圖3d）。
      為了研究FN RMS中細(xì)胞狀態(tài)的層次結(jié)構(gòu)，將數(shù)據(jù)建模為擴(kuò)散圖空間中的分化軌跡，并使用偽時(shí)間和RNA速度評(píng)估方向性（圖3e）。這一分析表明，細(xì)胞從高增殖的祖細(xì)胞樣狀態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)榉只潭雀叩拈g充質(zhì)樣或成肌樣細(xì)胞狀態(tài)。當(dāng)將惡性細(xì)胞狀態(tài)評(píng)分與正常肌源性細(xì)胞類型的相似性評(píng)分進(jìn)行比較時(shí)，分化狀態(tài)的差異也很明顯。這表明，祖細(xì)胞樣評(píng)分與未分化的肌源性祖細(xì)胞密切相關(guān)，而間充質(zhì)樣評(píng)分和成肌樣評(píng)分分別與分化程度較高的正常細(xì)胞類型，即肌源性間充質(zhì)細(xì)胞和成肌細(xì)胞/肌細(xì)胞密切相關(guān)。（圖3f）。然后，作者利用SCENIC pipeline進(jìn)行研究，以調(diào)查轉(zhuǎn)錄因子（TF）活性與軌跡特定偽時(shí)間的關(guān)系。這種分析顯示，隨著細(xì)胞向類間質(zhì)樣狀態(tài)進(jìn)展，幾個(gè)已知在上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）中發(fā)揮作用的轉(zhuǎn)錄因子的活性增加，包括TWIST1和ZEB1。相反，向肌母細(xì)胞樣狀態(tài)進(jìn)展的細(xì)胞表現(xiàn)出調(diào)節(jié)末端肌肉分化的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子活性上調(diào)，包括MYOD1、MYOG和MYF6（MRF4）。最后，高度增殖的祖細(xì)胞樣細(xì)胞(在兩個(gè)軌跡中的早期沿著偽時(shí)間)顯示細(xì)胞周期進(jìn)程調(diào)節(jié)因子的活性增加，包括幾個(gè)E2F轉(zhuǎn)錄因子以及肌肉前體標(biāo)記物SOX8。綜上所述，F(xiàn)N RMS細(xì)胞中的轉(zhuǎn)錄細(xì)胞狀態(tài)可以按照反映早期成肌分化的分化軌跡組織起來，在這種分化軌跡中，祖細(xì)胞樣細(xì)胞可以產(chǎn)生類似于終末分化的成肌細(xì)胞的細(xì)胞，或者向類似于成肌間充質(zhì)細(xì)胞的間充質(zhì)狀態(tài)發(fā)展。

5、FP RMS中的分化狀態(tài)反映了骨骼肌再生過程
      通過擴(kuò)展NMF分析，作者發(fā)現(xiàn)三個(gè)特定于FP RMS的元程序，其定義為在腫瘤樣本間相關(guān)的轉(zhuǎn)錄程序（圖4a-左圖）。幾乎所有被推測處于S期或G2/M期的細(xì)胞在這個(gè)元程序中得分較高（圖4a-右圖）。與在FN RMS腫瘤中發(fā)現(xiàn)的一樣，成肌樣細(xì)胞的程序以MYOG、TTN和CKB等終末成肌分化基因的表達(dá)為標(biāo)志。最后，被稱為"衛(wèi)星細(xì)胞樣"（SC-like）的程序的特征NOTCH3受體基因、Notch通路靶標(biāo)，包括HEY1和HES1，以及編碼V型和VI型膠原蛋白的基因的表達(dá)。這些基因在肌肉中的衛(wèi)星細(xì)胞中具有特定調(diào)控靜止、自我更新和激活的作用。對(duì)每個(gè)元程序?qū)蝹€(gè)細(xì)胞的評(píng)分顯示了類似肌母細(xì)胞和SC-like程序之間的相互排斥關(guān)系，而增殖性程序與兩者都不相關(guān)，并且通常限制在對(duì)前兩個(gè)程序得分較低的細(xì)胞中（圖4b）。
      與FN樣本類似，腫瘤之間的離散細(xì)胞狀態(tài)比例有很大的差異，特別是在增殖期和SC樣狀態(tài)之間（圖4c）。使用RNA-FISH驗(yàn)證了每個(gè)元程序的表達(dá)以及類似肌母細(xì)胞和SC-like程序的相互排斥關(guān)系（圖4d）。將元程序評(píng)分與邏輯回歸定義的細(xì)胞相似性評(píng)分進(jìn)行比較顯示，類似肌母細(xì)胞的程序與正在進(jìn)行終末分化的細(xì)胞類型（肌母細(xì)胞和肌細(xì)胞）強(qiáng)相關(guān)，而SC-like程序與出生后的衛(wèi)星細(xì)胞最為相似（圖4e）。增殖性程序評(píng)分與任何正常肌肉細(xì)胞類型的相關(guān)性不強(qiáng)，支持這個(gè)程序僅僅是細(xì)胞周期活動(dòng)的指標(biāo)。軌跡推斷表明，得分高的類似肌母細(xì)胞或SC-like程序的細(xì)胞位于分化連續(xù)體的兩個(gè)極端，而增殖性細(xì)胞則表現(xiàn)為一個(gè)未分化的中間狀態(tài)（圖4f）。然而，在這種情況下，RNA速度的結(jié)果并沒有明確地暗示軌跡的嚴(yán)格方向性（圖4e）。最后，TF活性分析顯示，朝著類似肌母細(xì)胞狀態(tài)發(fā)展的細(xì)胞具有較高的MYOG和MYOD1活性，而增殖狀態(tài)的細(xì)胞則表現(xiàn)出較高的E2F TF活性。值得注意的是，除了NOTCH信號(hào)通路效應(yīng)因子TF HEY1的高活性外，SC-like狀態(tài)還與關(guān)鍵的衛(wèi)星細(xì)胞調(diào)節(jié)因子PAX7的活性上調(diào)相關(guān)，進(jìn)一步支持FP RMS中SC-like細(xì)胞狀態(tài)與正常衛(wèi)星細(xì)胞的相似性。總的來說， FP RMS中共享的細(xì)胞狀態(tài)異質(zhì)性形成了一個(gè)類似于骨骼肌再生的分化軌跡，其中SC-like細(xì)胞通過增殖、未分化的細(xì)胞狀態(tài)連接到類似終末分化肌母細(xì)胞的細(xì)胞狀態(tài)。

6、在RMS腫瘤器官模型中驗(yàn)證亞型特異性的惡性細(xì)胞狀態(tài)
      為了確定上述亞型特異性細(xì)胞狀態(tài)是否與腫瘤細(xì)胞本身相關(guān)，作者試圖將腫瘤微環(huán)境（TME）的影響與惡性細(xì)胞分開。作者對(duì)使用NMF定義的每個(gè)亞型特定的Meta程序的腫瘤類器官細(xì)胞進(jìn)行了評(píng)分。在FN腫瘤器官細(xì)胞中，3個(gè)程序之間的關(guān)系與原發(fā)性RMS腫瘤觀察到的類似：表達(dá)mesenchymal-like程序和myoblast-like程序是互斥的，而對(duì)progenitor-like程序得分較高的細(xì)胞在其他兩個(gè)程序中得分較低。同樣，在FP腫瘤器官細(xì)胞中，myoblast-like和SC-like程序之間存在強(qiáng)烈的負(fù)相關(guān)性，而高得分的proliferative程序在較低得分的這兩個(gè)程序中更常見。接下來，為了評(píng)估是否保留了患者特異性的細(xì)胞狀態(tài)異質(zhì)性，作者直接比較了來自原發(fā)性腫瘤和衍生腫瘤器官的細(xì)胞的元程序得分，其中有4個(gè)患者有匹配的樣本?？傮w而言，亞型特異性的元程序得分在原發(fā)性腫瘤和腫瘤器官樣本之間有重疊。在RMS012中，與原發(fā)性腫瘤細(xì)胞相比，腫瘤器官中的細(xì)胞通常對(duì)mesenchymal-like程序得分較低，這可能是由于體外選擇對(duì)較不增殖的mesenchymal-like狀態(tài)細(xì)胞的影響。綜上所述，原發(fā)腫瘤中存在的亞型特定細(xì)胞狀態(tài)也反映在RMS腫瘤器官模型中，這表明這種異質(zhì)性確實(shí)在很大程度上是惡性細(xì)胞固有的，而不是由TME誘導(dǎo)的。
7、惡性細(xì)胞狀態(tài)與患者預(yù)后密切相關(guān)
      綜上所述，NMF定義的轉(zhuǎn)錄程序的分析結(jié)果使作者能夠提出FN和FP RMS腫瘤的細(xì)胞狀態(tài)和分化軌跡的統(tǒng)一模型（圖5a，b）。FN腫瘤是一種高度增殖的細(xì)胞，具有早期成肌祖細(xì)胞(祖細(xì)胞樣細(xì)胞)的特征，可分化為兩種類型：肌源性間充質(zhì)細(xì)胞(間充質(zhì)樣細(xì)胞)或終末分化成肌細(xì)胞/肌細(xì)胞(成肌細(xì)胞樣細(xì)胞)。另一方面，在FP腫瘤中，高增殖細(xì)胞(增殖期)是類似分化的肌細(xì)胞(肌母細(xì)胞樣)或出生后骨骼肌駐留衛(wèi)星細(xì)胞(SC樣細(xì)胞)之間的中間細(xì)胞。為了研究RMS腫瘤的分化狀態(tài)是否會(huì)影響它們的臨床行為，作者對(duì)一組已發(fā)布的腫瘤樣本的基因表達(dá)譜進(jìn)行了評(píng)分，以獲得每個(gè)元程序的分?jǐn)?shù)。值得注意的是，分化程度高的FN RMS患者(間充質(zhì)樣+成肌樣)的OS概率明顯好于分化程度低的患者（p = 0.00069，圖5c左圖）。這一結(jié)果特別耐人尋味，因?yàn)榧?xì)胞狀態(tài)程序本身都不能預(yù)測結(jié)果。相反，未分化祖細(xì)胞樣瘤的高分意味著OS明顯比低分的FN瘤差（p = 0.035，圖5c右圖）。作者比較了分化和祖細(xì)胞樣評(píng)分與先前驗(yàn)證的元基因評(píng)分對(duì)FN RMS患者分層的預(yù)測能力。雖然使用MG5.FN分?jǐn)?shù)區(qū)分高風(fēng)險(xiǎn)和低風(fēng)險(xiǎn)病例的效果略微更顯著，但分化分?jǐn)?shù)預(yù)測了一組預(yù)后明顯較差的患者（圖5c）。值得注意的是，MG5.FN分?jǐn)?shù)中沒有一個(gè)基因與構(gòu)成任何元程序分?jǐn)?shù)的基因重疊。在FP RMS患者中，SC樣程序的高表達(dá)與OS的延長有關(guān)(p=0.017)，而高增殖評(píng)分表明OS較短（p = 0.029，圖5d）。成肌樣細(xì)胞程序在FP腫瘤中的差異表達(dá)并不能預(yù)測患者的存活率?？傊?，這些數(shù)據(jù)表明，在FN和FP兩種RMS亞型中，具有更多分化狀態(tài)細(xì)胞比例的腫瘤表現(xiàn)出比高水平增殖、較低分化細(xì)胞更好的預(yù)后。

參考文獻(xiàn)：
DeMartino J, Meister MT, Visser LL, Brok M, Groot Koerkamp MJA, Wezenaar AKL, Hiemcke-Jiwa LS, de Souza T, Merks JHM, Rios AC, Holstege FCP, Margaritis T, Drost J. Single-cell transcriptomics reveals immune suppression and cell states predictive of patient outcomes in rhabdomyosarcoma. Nat Commun. 2023 May 27;14(1):3074.