NAT10/ac4C/FOXP1通過重編程宮頸癌的糖酵解代謝促進(jìn)惡性進(jìn)展并促進(jìn)免疫抑制

欄目:最新研究動態(tài) 發(fā)布時間:2024-05-20
在免疫檢查點抑制劑(ICIs)(如抗-PD-1/PD-L1抗體)取得的突破性臨床成果的推動下,免疫療法近來已成為宮頸癌(CCa)的主要治療方法......

 

       在免疫檢查點抑制劑(ICIs)(如抗-PD-1/PD-L1抗體)取得的突破性臨床成果的推動下,免疫療法近來已成為宮頸癌(CCa)的主要治療方法。由NAT10催化的 N4-乙酰胞苷(ac4C)修飾是癌癥中mRNA的一種重要轉(zhuǎn)錄后修飾。然而,它對CCa中免疫失調(diào)和腫瘤免疫療法反應(yīng)的影響仍然是個謎。在本研究中,初步觀察到NAT10在CCa組織中的表達(dá)明顯增加,這在臨床上與不良預(yù)后有關(guān)。隨后研究發(fā)現(xiàn),HOXC8 通過與其啟動子結(jié)合激活了NAT10,從而刺激FOXP1 mRNA的ac4C 修飾并提高其翻譯效率,最終導(dǎo)致誘導(dǎo)GLUT4和KHK的表達(dá)。此外,NAT10/ac4C/FOXP1軸活性導(dǎo)致糖酵解增加,CCa 細(xì)胞的乳酸分泌持續(xù)增加。富含乳酸的腫瘤微環(huán)境(TME)進(jìn)一步增強(qiáng)了腫瘤浸潤調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Tregs)的免疫抑制特性。令人印象深刻的是,NAT10敲除增強(qiáng)了PD-L1阻斷劑介導(dǎo)的體內(nèi)腫瘤消退效果。綜上所述,研究結(jié)果揭示了NAT10在啟動癌細(xì)胞糖酵解和免疫抑制之間的串聯(lián)過程中的致癌作用,它可以成為CCa中PD-1/PD-L1阻斷協(xié)同免疫療法的靶點。本文于2023年10月發(fā)表于Advanced Science》,IF=15.1。

技術(shù)路線

 

 

 

實驗結(jié)果

1.  NAT10在CCa中發(fā)揮潛在的致癌作用

       首先,作者根據(jù)病理診斷結(jié)果,分析了由17例宮頸上皮內(nèi)瘤變患者樣本、95例CCa患者樣本和32例對照組樣本組成的TMA,從而驗證了計算機(jī)結(jié)果。重要的是,作者的研究結(jié)果證實了NAT10蛋白在CCa標(biāo)本中的表達(dá)上調(diào)(圖1a),而且這種異常上調(diào)與CCa患者較差的臨床病理特征有關(guān),如腫瘤分期高(P<0.05)(圖1b)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P<0.05)(圖1c)。此外,NAT10表達(dá)的增加與Ki-67表達(dá)的增加呈正相關(guān)(P<0.05)(圖1d),Ki-67是癌細(xì)胞增殖和預(yù)后不良的標(biāo)志物。

       為了描述NAT10高表達(dá)的CCa患者的突變情況,根據(jù)NAT10表達(dá)的中位水平分層比較了NAT10高表達(dá)組和NAT10低表達(dá)組的突變情況(插入/缺失/單核苷酸變異)。為了進(jìn)行這項分析,研究人員使用卡方檢驗分析了通過SangerBox從TCGA數(shù)據(jù)庫下載的CCa患者數(shù)據(jù)。結(jié)果顯示,在NAT10表達(dá)上調(diào)的CCa組織中,TP53、UBR4、KRAS和FBN1等關(guān)鍵基因的突變率明顯高于NAT10低表達(dá)的CCa組織(圖1e)。顯然,NAT10在CCa中的表達(dá)與關(guān)鍵的免疫檢查點通路密切相關(guān)。ESTIMATE分析進(jìn)一步表明,NAT10上調(diào)與CCa較低的ESTIMATE評分和基質(zhì)評分相關(guān),這表明NAT10在調(diào)節(jié)CCa腫瘤免疫中起著關(guān)鍵作用(圖1f-h)。為了研究NAT10對無病生存期(DFS)和總生存期(OS)的影響,作者從TCGA數(shù)據(jù)庫中檢索了CCa患者的生存數(shù)據(jù)。Kaplan-Meier生存分析顯示,NAT10的高表達(dá)與CCa患者的OS呈弱相關(guān)(P = 0.03),并與DFS縮短有關(guān)(P = 0.02)(圖1i,j)。

 

 

 

2. 轉(zhuǎn)錄因子(TF)HOXC8激活CCa中NAT10的轉(zhuǎn)錄

       為闡明CCa中NAT10上調(diào)的機(jī)制,作者通過整合ATAC-seq和RNA-seq數(shù)據(jù)確定了相關(guān)的TF(圖2a)。由于90%以上的CCa病例都是由于感染了高危HPV類型所致,作者利用集成基因組學(xué)瀏覽器(IGV)識別了NAT10轉(zhuǎn)錄起始位點(TSS)周圍可訪問染色質(zhì)的信號,并旨在確定HFF-1(非癌對照)、H8(感染HPV16 E6和E7的非癌細(xì)胞)和SiHa(感染HPV16 E6和E7的CCa細(xì)胞)細(xì)胞中可訪問染色質(zhì)區(qū)域的候選TF(圖2b)。通過利用HOMER算法從頭發(fā)現(xiàn)基團(tuán),作者確定了32個 TF基團(tuán),并將重點縮小到SiHa細(xì)胞中富集的基團(tuán)。從三個不同組中生成的RNA-seq 熱圖顯示了幾個可能調(diào)控NAT10表達(dá)的潛在TF(圖2c-e)。通過重疊四個對比組中差異表達(dá)的TFs,HOXC8成為SiHa細(xì)胞中僅有的高表達(dá)TFs(圖 2f,g)。此外,TCGA分析表明,HOXC8 mRNA在CCa中表達(dá)明顯上調(diào)(P<0.05)(圖2h),這與癌癥分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)(P<0.05)(圖2i,j)。值得注意的是,基因表達(dá)譜交互分析(GEPIA)顯示,HOXC8 mRNA水平與CCa中NAT10的表達(dá)水平呈正相關(guān)(P<0.05)(圖2k),而高水平的HOXC8 mRNA表達(dá)也與較短的DFS時間顯著相關(guān)(P<0.05)(圖2l)。

       為了澄清這一關(guān)鍵TF對NAT10轉(zhuǎn)錄的影響,進(jìn)行了雙熒光素酶試驗。共轉(zhuǎn)染 HOXC8和NAT10啟動子質(zhì)??娠@著提高熒光素酶活性,螢火蟲熒光素酶/腎熒光素酶比率證明了這一點,而在轉(zhuǎn)染載體對照質(zhì)?;騿为?dú)轉(zhuǎn)染NAT10啟動子質(zhì)粒后,兩種CCa細(xì)胞系的熒光素酶活性都有所下降(圖2m)。與這些發(fā)現(xiàn)一致的是,Western 印跡結(jié)果表明,引入靶向HOXC8的特異性siRNA后,NAT10在CCa細(xì)胞中的表達(dá)明顯受到抑制(圖2n)。總之,這些數(shù)據(jù)有力地表明,HOXC8可通過與NAT10 啟動子區(qū)域結(jié)合并促進(jìn)其轉(zhuǎn)錄,從而增加NAT10在CCa細(xì)胞中的表達(dá)(圖2o)。

 

 

 

3. NAT10基因敲除抑制體外和體內(nèi)CCa細(xì)胞增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移

       如圖3a,b所示,CCa細(xì)胞中的NAT10水平明顯高于HFF-1細(xì)胞。免疫熒光檢測進(jìn)一步表明,NAT10主要定位于細(xì)胞核內(nèi),沒有核輸出。為了闡明NAT10在CCa中的功能作用,作者利用CRISPR/Cas9基因編輯系統(tǒng)成功建立了穩(wěn)定的NAT10雜合敲除細(xì)胞系(NAT10+/- SiHa),并采用sgRNA敲除了NAT10在CaSki和U14 CCa細(xì)胞中的表達(dá)(圖3c)。如CCK-8試驗所示,NAT10的耗竭或抑制會顯著抑制細(xì)胞增殖(圖3d),而集落形成試驗則表明,體外敲除NAT10會大大削弱集落形成能力(圖 3e)。此外,Transwell試驗表明,抑制或敲除NAT10能有效抑制CCa細(xì)胞的遷移和侵襲(圖3f)。

       為了進(jìn)一步確定體外NAT10誘導(dǎo)的CCa細(xì)胞增殖是否賦予了體內(nèi)腫瘤生長能力,作者使用標(biāo)記有螢火蟲熒光素酶(-luc)的穩(wěn)定沉默NAT10的SiHa細(xì)胞(NAT10+/- SiHa)建立了裸鼠皮下異種移植模型。在皮下注射SiHa或NAT10+/- SiHa細(xì)胞的小鼠中,下調(diào)NAT10能明顯抑制腫瘤生長(圖3g)。體內(nèi)研究結(jié)束后,切除腫瘤,觀察到NAT10基因敲除CCa腫瘤的生長率下降(圖3h)。此外,通過活體動物成像檢測到的熒光素酶信號強(qiáng)度每周顯著增加也證明了腫瘤的持續(xù)生長(圖3i,j)。這些觀察結(jié)果證實,NAT10具有致癌作用,可促進(jìn)CCa細(xì)胞增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移。

 

 

 

4. FOXP1是NAT10修飾ac4C的靶點,NAT10以ac4C依賴的方式增強(qiáng)其翻譯效率

       作者對野生型和NAT10+/- SiHa細(xì)胞進(jìn)行了acRIP-seq、RNA-seq和Ribo-seq分析,以鑒定CCa細(xì)胞中ac4C修飾的轉(zhuǎn)錄本,并揭示ac4C修飾促進(jìn)CCa進(jìn)展的分子機(jī)制(圖4a)。通過acRIP-seq分析,作者確定了808個ac4C峰,并利用MEME算法發(fā)現(xiàn)CXXCXXCXX主題在SiHa細(xì)胞中高度富集(圖4b)。此外,與SiHa細(xì)胞相比,在NAT10低表達(dá)的細(xì)胞中,ac4C在編碼區(qū)的分布從34.9%降至31.9%,在3′UTR 的分布從37.4% 增至45.5%(圖4c)。此外,對因NAT10基因敲除而顯著改變的 ac4C峰的注釋和分析表明,在NAT10基因沉默的SiHa細(xì)胞中,mRNA的總體ac4C 水平顯著下降(圖4d,e)。此外,通過京都基因和基因組百科全書(KEGG)富集分析來分析差異表達(dá)基因(DEGs),結(jié)果顯示差異表達(dá)基因在以下通路中顯著富集:細(xì)胞粘附通路、癌癥通路、PI3K-Akt 信號通路、mRNA 監(jiān)控通路和HPV感染通路(圖 4f)。這一發(fā)現(xiàn)表明,RNA的ac4C修飾可能參與了CCa發(fā)育的調(diào)控。

       此外,作者使用Ribo-seq評估了核糖體保護(hù)讀數(shù)所代表的每種mRNA的核糖體負(fù)載量(圖4g)。Ribo-seq分析結(jié)果表明,由于翻譯效率降低,ac4C 修飾水平降低導(dǎo)致轉(zhuǎn)錄下調(diào)(圖4h)。耐人尋味的是,在68個mRNA中,F(xiàn)OXP1 mRNA在NAT10 下調(diào)后表現(xiàn)出最明顯的變化,通過acRIP-seq、Ribo-seq和RNA-seq測定的轉(zhuǎn)錄本豐度分別降低了6.39倍、5.12倍和2.78倍(圖4i)。因此,考慮到ac4C修飾在CCa中的作用,以及通過IGV軟件可視化識別RNA上的ac4C修飾峰(圖4j),作者推測FOXP1可能是NAT10在CCa細(xì)胞中的一個關(guān)鍵靶標(biāo)。

       為了驗證FOXP1 mRNA是否是CCa細(xì)胞中ac4C修飾的直接靶標(biāo),進(jìn)行了acRIP-qPCR試驗。與對照細(xì)胞相比,去除了NAT10的CCa細(xì)胞中FOXP1 mRNA上的ac4C 水平顯著降低(約10倍)(圖4k)。此外,作者構(gòu)建了含有野生型FLAG標(biāo)記的NAT10(NAT10-wt)或N-乙酰轉(zhuǎn)移酶修飾位點(del 558-753aa)突變的NAT10(NAT10-mut)序列的質(zhì)粒(圖4l)。引入NAT10-wt而非NAT10-mut會增加FOXP1的表達(dá)(圖4m)。因此,這些結(jié)果共同表明,NAT10介導(dǎo)的ac4C修飾在CCa細(xì)胞中FOXP1 的上調(diào)過程中起著至關(guān)重要的作用。

       然而,NAT10沉默導(dǎo)致CCa細(xì)胞中FOXP1蛋白水平顯著下降,而不影響其mRNA水平(圖4n,o)。因此,作者評估了CCa細(xì)胞中單個mRNA的穩(wěn)定性,發(fā)現(xiàn)NAT10 基因敲除并沒有顯著影響FOXP1轉(zhuǎn)錄本的穩(wěn)定性(圖4p)??紤]到Ribo-seq的結(jié)果,這些數(shù)據(jù)共同表明,NAT10介導(dǎo)的ac4C修飾可能會調(diào)節(jié)FOXP1的翻譯效率,而不是其mRNA的穩(wěn)定性。

 

 

 

5. 過表達(dá)FOXP1可逆轉(zhuǎn)NAT10缺乏對CCa細(xì)胞惡性表型的影響

       由于FOXP1在CCa中的功能尚不明確,作者初步比較了20個CCa組織和20個正常宮頸上皮組織中的FOXP1蛋白水平,發(fā)現(xiàn)與正常組織相比,CCa組織中的FOXP1蛋白水平顯著升高(P<0.01)(圖5a)。通過GEPIA進(jìn)行的Kaplan-Meier分析顯示,F(xiàn)OXP1 mRNA表達(dá)增加的CCa患者的DFS預(yù)后較差(P = 0.039)(圖5b)。最重要的是,F(xiàn)OXP1 的表達(dá)水平與CCa組織中NAT10的水平呈正相關(guān)(圖5c)。此外,與HFF-1細(xì)胞相比,F(xiàn)OXP1在SiHa和CaSki細(xì)胞中表達(dá)過高,而在U14細(xì)胞中FOXP1表達(dá)較低(圖3b)。敲除FOXP1顯著抑制了CCa細(xì)胞的增殖(圖5d)、遷移和侵襲(圖5e-g)。

       為了進(jìn)一步驗證FOXP1在NAT10介導(dǎo)的促進(jìn)CCa進(jìn)展中的作用,作者在敲除NAT10的SiHa和CaSki細(xì)胞上進(jìn)行了過表達(dá)實驗(圖5h)。重要的是,遷移和侵襲實驗結(jié)果表明,過表達(dá)FOXP1能有效恢復(fù)NAT10敲除的CCa細(xì)胞的遷移和侵襲能力(圖5i-k)。此外,利用shFOXP1和NAT10+/- FOXP1 SiHa細(xì)胞建立了皮下腫瘤發(fā)生模型。與體內(nèi)結(jié)果一致,該模型的結(jié)果證實,過表達(dá)FOXP1能減弱NAT10敲除對體內(nèi)腫瘤生長的抑制作用(圖3g-j),進(jìn)一步強(qiáng)調(diào)了NAT10催化的ac4C修飾在 CCa腫瘤發(fā)生中的關(guān)鍵作用??傊?,這些數(shù)據(jù)強(qiáng)調(diào)了FOXP1上調(diào)在CCa惡性進(jìn)展中的致癌功能;因此,F(xiàn)OXP1上調(diào)可改善NAT10敲除在CCa細(xì)胞中的抑瘤效應(yīng)。

 

 

 

6. NAT10/ac4C/FOXP1軸通過靶向GLUT4和KHK促進(jìn)糖酵解

       CUT&Tag可生成高效的高分辨率測序文庫,用于分析各種染色質(zhì)成分,作者利用CUT&Tag確定了在SiHa細(xì)胞中觀察到的幾乎所有峰的覆蓋范圍都小于1000bp(圖 6a),并且在整組位點,尤其是在TSS處顯示出中等強(qiáng)度的信號(圖6b)。此外,對所有峰的信號值進(jìn)行了細(xì)致的計算,并生成了熱圖,表明信號強(qiáng)烈集中在富集位點附近(圖6c),其中基因啟動子區(qū)域(啟動子≤1000 bp)的富集程度最高(圖6d)。通過GO和KEGG分析鑒定FOXP1結(jié)合基因的細(xì)胞代謝過程(圖6e),作者推測 FOXP1可能在葡萄糖代謝中起著關(guān)鍵的調(diào)控作用,這促使作者研究參與糖酵解代謝的關(guān)鍵酶。

       有趣的是,CUT&Tag測序數(shù)據(jù)表明,F(xiàn)OXP1在參與糖酵解的GLUT4和KHK啟動子中具有強(qiáng)大的富集作用(圖6f),這在許多文獻(xiàn)中都有廣泛記載。此外,根據(jù) GEPIA對TCGA數(shù)據(jù)集的分析,CCa中GLUT4的表達(dá)與FOXP1和NAT10的表達(dá)呈正相關(guān),而KHK的表達(dá)與NAT10的表達(dá)呈正相關(guān)(圖 6h,i)。此外,經(jīng)qRT-PCR(圖6j-m)和Western印跡(圖6n)證實,刪除NAT10或FOXP1會導(dǎo)致GLUT4和KHK在轉(zhuǎn)錄和翻譯水平上的表達(dá)受抑制,這表明FOXP1會調(diào)節(jié)GLUT4和KHK的表達(dá)。

       為了研究NAT10在調(diào)節(jié)糖酵解以促進(jìn)CCa細(xì)胞惡性行為中的作用,作者通過測量細(xì)胞外酸化率(ECAR)、葡萄糖消耗、乳酸鹽產(chǎn)生和ATP水平來評估糖酵解通量。如圖7a所示,NAT10 缺失的CCa細(xì)胞表現(xiàn)出明顯的葡萄糖消耗減少以及乳酸鹽和 ATP 生成減少。與這些發(fā)現(xiàn)一致的是,沉默F(xiàn)OXP1也導(dǎo)致葡萄糖消耗、乳酸鹽和ATP 生成減少(圖7b-d),而在NAT10敲除背景下過表達(dá)FOXP1時,糖酵解能力得到恢復(fù)(圖7e-h)。此外,ECAR 測量結(jié)果不僅驗證了NAT10或FOXP1基因敲除后CCa 細(xì)胞中糖酵解能力的下降(圖 7i-l),而且還表明過表達(dá)FOXP1可逆轉(zhuǎn)這種效應(yīng)(圖 7m,n)然而,在轉(zhuǎn)染NAT10突變體的CCa細(xì)胞中觀察到的糖酵解代謝水平一直較低(圖7o,p),這表明NAT10催化的ac4C修飾對促進(jìn)CCa中的糖酵解有重要作用。此外,由缺乏NAT10的細(xì)胞建立的SiHa腫瘤異種移植顯示NAT10、FOXP1、GLUT4 和KHK的染色顯著降低(圖7q)??傊髡叩难芯拷Y(jié)果表明,ac4C修飾誘導(dǎo)的FOXP1上調(diào)可激活CCa細(xì)胞中GLUT4和KHK的轉(zhuǎn)錄,從而增強(qiáng)糖酵解活性。

 

 

 

 

7. NAT10/ac4C/FOXP1軸活性增加高度糖酵解腫瘤中的Treg浸潤

       如上所述,作者的研究發(fā)現(xiàn),NAT10和FOXP1的上調(diào)促進(jìn)了CCa細(xì)胞的增殖、侵襲、遷移和糖酵解能力,這表明NAT10介導(dǎo)的FOXP1乙酰化可能是免疫逃避的關(guān)鍵(圖8a),生物信息學(xué)分析也表明了這一點(圖1g,h)。為了明確NAT10/ac4C/FOXP1軸與CCa中免疫抑制之間的關(guān)系(圖8a),對TMA核進(jìn)行了PD-L1免疫組化染色和統(tǒng)計分析,結(jié)果顯示CCa患者中NAT10和PD-L1的表達(dá)呈正相關(guān)(圖8b,c)。此外,作者還通過 Western 印跡進(jìn)一步驗證了CCa細(xì)胞中NAT10、FOXP1和PD-L1 之間的正相關(guān)性(圖8d)。為了評估靶向 NAT10/ac4C/FOXP1 軸對體內(nèi)腫瘤進(jìn)展的影響,作者用U14-kdNAT10和U14-oeFOXP1細(xì)胞在C57BL/6小鼠體內(nèi)建立了皮下腫瘤模型,然后在植入后第10天和第13天用抗PD-L1抗體(每天2.5 mg kg-1)治療這些小鼠。有趣的是,在用IgG作為對照的小鼠中,NAT10的下調(diào)大大抑制了CCa的進(jìn)展,而對照組和U14-oeFOXP1組之間的腫瘤生長沒有明顯差異(圖8e,f)。此外,為了研究與 NAT10 基因敲除聯(lián)合治療對抗 PD-L1 療效的潛在協(xié)同增效作用,作者還監(jiān)測了模型中不同組別抗PD-L1抗體治療后的腫瘤生長情況。值得注意的是,U14-kdNAT10組的腫瘤生長速度明顯慢于單藥治療組(圖8f,g)。因此,與NAT10/ac4C/FOXP1軸在促進(jìn)免疫檢查點基因上調(diào)和隨后的免疫逃避中的作用一致,抑制該軸可導(dǎo)致PD-L1阻斷誘導(dǎo)的腫瘤消退,從而相應(yīng)地抑制CCa的進(jìn)展。聯(lián)合療法的療效遠(yuǎn)遠(yuǎn)優(yōu)于單一療法。

       為了評估NAT10/ac4C/FOXP1軸在CCa的TME中誘導(dǎo)的免疫浸潤,作者通過對U14-Ctrl和U14-oeFOXP1模型樣本的RNA-seq分析,分析了免疫功能正常條件下NAT10誘導(dǎo)的FOXP1過表達(dá)的綜合分子譜。根據(jù)RNA-seq分析結(jié)果,作者對與TME相關(guān)的DEGs進(jìn)行了GO富集分析,旨在評估TME的變化。如圖8h所示,DEGs主要富集在代謝過程、生物調(diào)控和免疫相關(guān)的GO項中,這與本研究之前的結(jié)果一致。此外,與對照組相比,U14-oeFOXP1組小鼠的組織中觀察到PD-L1上調(diào),如火山圖所示(圖8i);此外,包括 CTLA4、CXCL9、ARG1和FOXP3在內(nèi)的幾個關(guān)鍵基因在U14-oeFOXP1 組小鼠的組織中上調(diào),表明FOXP1的過度表達(dá)可能在檢查點基因表達(dá)中發(fā)揮了重要作用。

       此外,作者還利用CIBERSORT算法對22種腫瘤浸潤免疫細(xì)胞(TIICs)進(jìn)行了相關(guān)分析,發(fā)現(xiàn)CCa具有獨(dú)特的免疫表型特征。FOXP1和TIICs的差異表達(dá)和相關(guān)性分析結(jié)果表明,F(xiàn)OXP1過表達(dá)與Tregs和活化CD4+ T細(xì)胞的浸潤呈正相關(guān),但與M1巨噬細(xì)胞、靜息NK細(xì)胞和靜息CD4+記憶T細(xì)胞的浸潤呈負(fù)相關(guān)(圖8j)。隨后,作者進(jìn)行了流式細(xì)胞分析,發(fā)現(xiàn)FOXP1的上調(diào)能有效促進(jìn)Treg在TME內(nèi)的浸潤,而NAT10的敲除則顯示出相反的趨勢(圖8k,l)。綜合來看,差異表達(dá)和相關(guān)性分析進(jìn)一步證實了FOXP1和NAT10與CCa組織中免疫抑制性TME密切相關(guān)的假設(shè)。隨后,在腫瘤切除一個月后,測量了TME內(nèi)的乳酸水平,發(fā)現(xiàn)U14-oeFOXP1組明顯高于U14-Ctrl組,而U14-kdNAT10組則較低(圖8m)??紤]到代謝失調(diào)與免疫細(xì)胞浸潤之間的相互影響,作者通過免疫組化方法檢測并驗證了不同組中PD-L1的表達(dá),結(jié)果顯示U14-oeFOXP1組TME中PD-L1的表達(dá)呈上升趨勢(圖8n)。綜上所述,作者的研究結(jié)果表明了CCa中癌癥代謝與免疫反應(yīng)之間的相互影響。具體來說,在CCa腫瘤中靶向NAT10-FOXP1軸不僅能阻礙腫瘤細(xì)胞的糖酵解,還能減少Treg群體向TME的浸潤,從而協(xié)同增強(qiáng)PD-L1阻斷劑的療效,最終阻止腫瘤進(jìn)展。綜上所述,作者的研究結(jié)果表明了CCa中癌癥代謝與免疫反應(yīng)之間的相互影響。具體來說,在CCa腫瘤中靶向NAT10-FOXP1軸不僅能阻礙腫瘤細(xì)胞的糖酵解,還能減少Treg群體向TME的浸潤,從而協(xié)同增強(qiáng)PD-L1阻斷劑的療效,最終阻止腫瘤進(jìn)展。

 

 

 

結(jié)論

       總之,作者提供了令人信服的體外和體內(nèi)證據(jù),揭示了NAT10在CCa進(jìn)展過程中的致癌作用,并確定了作為一種重要的表觀轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子,NAT10介導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞ac4C修飾可上調(diào)TF FOXP1,從而增加Treg浸潤,并通過重編程糖酵解代謝促進(jìn)CCa免疫抑制。此外,NAT10 基因敲除可通過損害腫瘤細(xì)胞糖酵解、減少乳酸生成和增強(qiáng)腫瘤組織間質(zhì)內(nèi)的免疫監(jiān)視來顯著提高PD-L1阻斷療法的療效,最終導(dǎo)致腫瘤消退。對NAT10介導(dǎo)的ac4C修飾的闡明有望極大地促進(jìn)對CCa的進(jìn)一步研究,并有助于開發(fā)前景廣闊的治療策略。

 

生信實驗

組織微陣列(TMA)構(gòu)建、免疫細(xì)胞譜分析、

常規(guī)分子實驗

免疫組化和肝性染色、雙熒光素酶報告基因檢測、免疫熒光檢測、糖酵解測定、ac4C乙?;疪NA免疫沉淀、acRIP-qPCR、蛋白質(zhì)印跡分析、定量逆轉(zhuǎn)錄PCR、mRNA穩(wěn)定性檢測、CHIP-qPCR

組學(xué)實驗

acRIP-seq、Ribo-seq、ATAC-seq 、CUT&Tag

細(xì)胞實驗

細(xì)胞培養(yǎng)、質(zhì)粒構(gòu)建、慢病毒生產(chǎn)和細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞增殖檢測、transwell檢測、流式細(xì)胞術(shù)

動物模型及病理實驗

動物研究 

參考文獻(xiàn)

Chen, X.Hao, Y.Liu, Y.Zhong, S.You, Y.Ao, K.Chong, T.Luo, X.Yin, M.Ye, M.He, H.Lu, A.Chen, J.Li, X.Zhang, J.Guo, X.NAT10/ac4C/FOXP1 Promotes Malignant Progression and Facilitates Immunosuppression by Reprogramming Glycolytic Metabolism in Cervical CancerAdv. Sci. 2023, 2302705.