失巢凋亡相關(guān)特征的風(fēng)險模型表明RAC3是肝細胞癌中一種新的腫瘤啟動子基因

肝細胞癌（HCC）細胞中的失巢凋亡抵抗可提高存活率和轉(zhuǎn)移率。本研究旨在建立一個基于失巢凋亡相關(guān)基因（ARGs）的模型來預(yù)測HCC患者的預(yù)后，并探討關(guān)鍵ARGs的臨床病理意義和功能。HCC隊列的轉(zhuǎn)錄表達模式由TCGA、GEO和ICGC匯編而成。進行單變量和LASSO多變量分析以篩查預(yù)后ARG。采用功能獲得和喪失研究、RNA測序和質(zhì)譜來闡明ARG在HCC中的潛在機制。我們建立了HCC預(yù)后的五基因ARGs風(fēng)險模型，1年生存期的AUC值為0.812。在這五個基因中，Rac家族小GTP酶3（RAC3）在HCC中相對于鄰近的正常組織上調(diào)，與HCC患者的總體生存率和無病生存率呈負相關(guān)。RAC3在HCC細胞中的沉默導(dǎo)致細胞凋亡增加，細胞增殖和侵襲減少。從機制上講，我們發(fā)現(xiàn)RAC3與SOX6的結(jié)合通過NNMT介導(dǎo)的cAMP/MAPK/Rap1信號的刺激促進HCC細胞的進展。特別是，靶向RAC3的小分子抑制劑EHop-016顯著抑制HCC的進展。該研究于2025年3月發(fā)表在《MedComm》，IF 10.7分。

技術(shù)路線：

主要研究結(jié)果：

1、具有臨床意義的ARGs篩查

   研究分析了從TCGA_LIHC數(shù)據(jù)集中獲取的480個抗凋亡相關(guān)基因（ARGs）的mRNA表達譜，并在癌癥基因數(shù)據(jù)庫（GeneCards）中識別出118個在肝細胞癌（HCC）組織與相鄰正常組織之間表達差異顯著的基因。其中，113個基因在腫瘤組織中表達上調(diào)，5個基因表達下調(diào)（圖1A），熱圖顯示了代表性差異表達基因（DEGs）（圖1B）。通過將HCC數(shù)據(jù)集GSE14520與118個DEGs進行交集分析，發(fā)現(xiàn)105個基因在兩個數(shù)據(jù)集中均有出現(xiàn)（圖1C），這些基因被選為構(gòu)建風(fēng)險模型的基礎(chǔ)。為了探究這105個基因的臨床意義，首先，我們將TCGA_LIHC中的370例HCC病例隨機分為兩組：包含222例的訓(xùn)練隊列和包含148例的測試隊列，兩組的臨床特征保持平衡（表S1）；隨后，我們對訓(xùn)練隊列應(yīng)用單變量Cox回歸分析以確定預(yù)后ARGs，發(fā)現(xiàn)105個ARGs中有58個與總生存（OS）顯著相關(guān)（圖1D）。

圖1：為HCC患者構(gòu)建ARG特征

2、基于ARGs的HCC患者無監(jiān)督聚類

   我們利用58個ARGs對HCC患者進行亞型分類。通過逐步增加聚類變量（k）的值，從2到9，觀察發(fā)現(xiàn)當(dāng)k=2時，組內(nèi)相似性（組內(nèi)相關(guān)性）最高，組間相似性（組間相關(guān)性）最低。這一最佳點表明，基于58個ARGs的表達譜，370例HCC患者可以被有效劃分為兩個不同的聚類群（C1和C2）（圖S1A）。C1聚類群中ARGs表達較低的患者比C2聚類群中ARGs表達較高的患者具有更長的總生存期（OS）（圖S1B）（p < 0.001）。熱圖展示了C1和C2聚類群中58個ARGs的轉(zhuǎn)錄表達譜（圖S1C）。進一步分析了C1和C2聚類群之間的差異表達基因（DEGs），共鑒定出2430個DEGs（圖S1D）。這些DEGs主要涉及細胞因子-細胞因子受體相互作用、細胞周期和細胞外基質(zhì)-受體相互作用等通路（圖S1E）?；蚣患治觯℅SEA）顯示，細胞因子-細胞因子受體相互作用和細胞外基質(zhì)受體相互作用等通路在C2聚類群中顯著富集，而脂肪酸代謝通路主要富集在C1聚類群中（圖S1F）。這些結(jié)果表明，基于ARGs的表達，不同亞型組的HCC患者在HCC進展過程中表現(xiàn)出不同的分子模式。

3、基于ARGs的風(fēng)險模型的建立與驗證

   為探索HCC的ARGs特征，我們采用逐步方法，將58個ARGs納入LASSO Cox回歸和多變量Cox回歸，以建立用于預(yù)測HCC患者生存結(jié)果的風(fēng)險模型。通過交叉驗證，最終從58個與OS強相關(guān)的ARGs中篩選出5個基因（S期激酶相關(guān)蛋白2 [SKP2]、ETS變體轉(zhuǎn)錄因子4 [ETV4]、溶質(zhì)載體家族2成員1 [SLC2A1]、分泌型磷酸蛋白1 [SPP1]和RAC3），用于構(gòu)建風(fēng)險模型，風(fēng)險模型的構(gòu)建方式如下：風(fēng)險評分 =（0.415×SKP2表達量）+（0.134×ETV4表達量）+（0.226×SLC2A1表達量）+（0.110×SPP1表達量）+（0.314×RAC3表達量）（圖1G）。在TCGA_LIHC訓(xùn)練隊列中，計算得出的中位風(fēng)險評分為0.911；評分低于此閾值的患者被劃分為低風(fēng)險組，而評分達到或超過0.911的患者被歸為高風(fēng)險組。高風(fēng)險隊列中這五個ARGs的表達水平更高，且隨著風(fēng)險評分的升高，總生存（OS）呈下降趨勢（圖1H）。當(dāng)將該風(fēng)險模型應(yīng)用于測試隊列和整個隊列（TCGA_LIHC 370例）時，結(jié)果與訓(xùn)練隊列一致，從而驗證其可靠性（圖1I、J）。

   高風(fēng)險組的個體在所有三個隊列中均顯示出顯著較差的總生存（OS），與低風(fēng)險組的個體相比（圖2A）。在訓(xùn)練隊列中進行的接收者操作特征（ROC）分析顯示，該風(fēng)險模型具有強大的預(yù)測能力，其曲線下面積（AUC）值分別為0.812、0.733和0.705，用于預(yù)測1年、3年和5年的生存率。相應(yīng)地，在測試隊列中，AUC值分別為0.754、0.607和0.602，用于相同的生存期，而在整個隊列中，AUC值分別為0.782、0.692和0.671（圖2B）。為進一步驗證模型的診斷預(yù)測準(zhǔn)確性，我們使用外部數(shù)據(jù)集ICGC_LIRI和GSE14520進行額外驗證，結(jié)果與初始訓(xùn)練隊列一致（圖2C、D）。

圖2：ARG特征預(yù)測HCC診斷和預(yù)后

4、ARGs信號作為HCC患者預(yù)后的獨立預(yù)測因子

   我們接下來研究ARGs特征與HCC患者的臨床特征之間的相關(guān)性。研究發(fā)現(xiàn)，在高風(fēng)險組和低風(fēng)險組之間，腫瘤分期、腫瘤分級和生存情況存在顯著差異（圖2E）。此外，ROC分析證實，風(fēng)險模型顯示出優(yōu)越的預(yù)測能力，其AUC值為0.782，優(yōu)于其他臨床特征，包括年齡、性別、分級和分期，在TCGA_LIHC隊列中（圖2F）。

   為確定ARGs特征的風(fēng)險評分是否可以作為HCC患者的獨立預(yù)后生物標(biāo)志物，我們對HCC隊列進行單變量和多變量Cox回歸分析，考慮風(fēng)險評分和其他臨床特征等變量。對于TCGA_LIHC隊列，單變量分析表明，年齡、腫瘤分級、腫瘤分期、血管侵犯或風(fēng)險評分與總生存（OS）相關(guān)（圖2G），而多變量分析證實，年齡、腫瘤分級、腫瘤分期或風(fēng)險評分可以獨立預(yù)測HCC患者的預(yù)后（圖2H）。對于GSE14520隊列，單變量和多變量分析均顯示TNM分期、巴塞羅那臨床肝癌（BCLC）分期或風(fēng)險評分與OS顯著相關(guān)（圖2I、J）。這些結(jié)果共同表明，從ARG特征得出的風(fēng)險評分有潛力作為HCC患者的獨立預(yù)后因素。 

5、免疫細胞浸潤和化療敏感性列線圖構(gòu)建與評價

   為提高風(fēng)險模型在臨床實踐中的應(yīng)用價值，我們在TCGA_LIHC基礎(chǔ)上構(gòu)建一個預(yù)測諾莫圖，用于估計1年、3年和5年的總生存期，該諾莫圖基于臨床特征，包括性別、腫瘤分級、年齡、腫瘤分期和ARGs特征的風(fēng)險評分（圖S2A）。ROC分析顯示諾莫圖具有良好的準(zhǔn)確性，AUC值分別為0.752、0.731和0.742（圖S2B），校準(zhǔn)曲線也證實諾莫圖的高準(zhǔn)確性（圖S2C）。這些結(jié)果表明，諾莫圖可以應(yīng)用于輔助臨床決策制定，并預(yù)測HCC患者的總生存期。

   HCC患者生存率的差異可能歸因于腫瘤免疫微環(huán)境的復(fù)雜性。我們分析了高風(fēng)險組和低風(fēng)險組之間免疫細胞浸潤和免疫相關(guān)通路的差異，發(fā)現(xiàn)在TCGA_LIHC隊列中，特別是被歸為高風(fēng)險的個體中，樹突狀細胞、巨噬細胞、Th2細胞和調(diào)節(jié)性T細胞顯著增加（p < 0.05）（圖S2D），而B細胞、肥大細胞和NK細胞等免疫細胞亞群則顯著下調(diào)（p < 0.05）（圖S2D）。在免疫相關(guān)通路方面，高風(fēng)險組中檢查點和主要組織相容性復(fù)合體I類分子的表達顯著增加（p < 0.05），而I型和II型干擾素反應(yīng)則顯著降低（p < 0.05）（圖S2E）。進一步研究高風(fēng)險組和低風(fēng)險組之間免疫亞型的差異發(fā)現(xiàn)，淋巴細胞耗竭樣本的分布在兩組之間相對平衡。然而，低風(fēng)險組中炎癥樣本的頻率更高，與之相比，高風(fēng)險組中以愈合傷口和干擾素-γ主導(dǎo)的樣本更為常見（圖S2F）。

   此外，在兩組之間對化療藥物的反應(yīng)也存在顯著差異。高風(fēng)險組對多西他賽和吉非替尼的IC50值顯著更高，表明對這些藥物的耐藥性更強。相反，高風(fēng)險組對吉西他濱和伊馬替尼的IC50值較低，意味著對這些藥物更敏感（圖S2G）?？傊?，從ARGs特征得出的風(fēng)險評分能夠預(yù)測HCC患者的生存率以及對化療藥物的反應(yīng)。

6、RAC3上調(diào)與HCC患者的腫瘤進展和預(yù)后不良有關(guān)

   隨后，我們發(fā)現(xiàn)風(fēng)險模型中五個ARGs的mRNA和蛋白水平在HCC組織中顯著高于相鄰正常組織（圖S3A、B）。此外，這五個ARGs表達的增加與總生存（OS）的降低顯著相關(guān)（圖S3C）。然而，只有RAC3與無病生存（DFS）的降低在統(tǒng)計學(xué)上顯著相關(guān)（p=0.026）（圖S3D）。因此，我們接下來專注于RAC3在HCC發(fā)生和發(fā)展中的作用及其機制。

   RAC家族包括RAC1、RAC2和RAC3，其中RAC3在HCC中與相鄰正常組織相比顯著上調(diào)（p < 0.001，3.3倍）（圖S4A）。此外，在TCGA泛癌分析中，如膀胱癌（BLCA）、乳腺癌（BRCA）、宮頸鱗狀細胞癌（CESC）、結(jié)腸癌（COAD）、食管癌（ESCA）、頭頸鱗狀細胞癌（HNSC）、肝細胞癌（LIHC）、肺腺癌（LUAD）、肺鱗癌（LUSC）、腎上腺皮質(zhì)癌（PCPG）、前列腺癌（PRAD）、胃癌（STAD）和子宮內(nèi)膜癌（UCEC）等腫瘤組織中也觀察到RAC3的顯著上調(diào)（圖S4B）。相比之下，RAC3在腎透明細胞癌（KICH）、腎癌（KIRC）、腎乳頭狀細胞癌（KIRP）和甲狀腺癌（THCA）的腫瘤組織中表達顯著降低（圖S4B）。此外，與低RAC3表達相比，高RAC3表達與膀胱癌、KIRC、肉瘤和甲狀腺癌患者的預(yù)后不良相關(guān)，但在乳腺癌和胰腺導(dǎo)管腺癌（PDAC）患者中則與更長的生存期相關(guān)（圖S4C）。

   我們基于GSE14520、GSE22058和ICGC_LIRI數(shù)據(jù)集對RAC3表達進行分析，結(jié)果證實RAC3 mRNA在HCC組織中顯著高于相鄰正常組織（圖3A）。此外，通過UALCAN對CPTAC數(shù)據(jù)庫的分析顯示，與相鄰正常組織相比，HCC組織中RAC3蛋白顯著上調(diào)（圖3B）。Kaplan–Meier繪圖分析顯示，RAC3高表達與HCC患者的預(yù)后不良相關(guān)，尤其是在II期和AJCC_T2期患者中（表S2，圖S5）。這些結(jié)果強烈表明，RAC3可以作為HCC患者的有希望的預(yù)后生物標(biāo)志物。

   隨后，我們通過qRT-PCR和西方印跡分析評估五種HCC細胞系中RAC3的表達水平（圖3C、D）。研究發(fā)現(xiàn)，RAC3在HCCLM3和HLE細胞中表達顯著，而在MHCC97H和Huh-7細胞中表達較低。此外，我們還對包含89對HCC腫瘤及其相鄰正常組織的HCC組織微陣列進行了免疫組化染色，以檢測RAC3的表達。同樣，我們觀察到RAC3在HCC組織中的表達顯著高于匹配的正常組織（圖3E、F）。RAC3蛋白表達與臨床病理參數(shù)之間的相關(guān)性分析顯示，高RAC3表達與大于3厘米的腫瘤（p=0.049）、腫瘤復(fù)發(fā)（p=0.034）和總生存期（OS）（p=0.001）之間存在顯著關(guān)聯(lián)（表1）。單變量分析進一步表明，腫瘤大?。╬=0.016）、腫瘤分級（p=0.027）、腫瘤包膜完整性（p=0.045）、TNM分期（p=0.006）和RAC3表達（p=0.005）與OS顯著相關(guān)（表S3）。我們進一步進行多變量Cox回歸分析，納入單變量分析中有顯著意義的變量，結(jié)果證實RAC3蛋白表達是OS的獨立預(yù)測因子（p=0.044）（表S4）。Kaplan–Meier生存曲線顯示，RAC3蛋白表達越高，預(yù)后越差（p=0.002）（圖3G），累積無復(fù)發(fā)生存率越高（p=0.044）（圖3H）?？傊?，這些結(jié)果表明，RAC3表達的升高在HCC的惡性程度和進展中起著關(guān)鍵作用。

圖3：RAC3在HCC組織中的表達和預(yù)后意義

7、RAC3促進HCC細胞的惡性表型

   基于TCGA_LIHC的GSEA富集分析顯示，RAC3表達與凋亡（ES=0.54，p=0.00）、細胞外基質(zhì)受體相互作用（ES=0.68，p=0.00）和細胞黏附分子CAMs（ES=0.62，p=0.00）呈正相關(guān)（圖S6A），表明其在抗凋亡抵抗中的潛在功能。此外，為評估RAC3在HCC中的作用，我們在Huh-7細胞系中建立了穩(wěn)定的RAC3過表達，并在HCCLM3和HLE細胞系中進行RAC3敲低。RAC3的敲低顯著抑制體外細胞增殖和侵襲，而RAC3的過表達則促進這些行為（圖4A、B）。此外，我們在HCCLM3細胞系中建立穩(wěn)定的RAC3敲低（圖S6B），并發(fā)現(xiàn)RAC3的敲低抑制細胞增殖和侵襲（圖S6C、D）。凋亡實驗顯示，RAC3抑制后凋亡率顯著增加（圖4C）。

   然后，我們構(gòu)建一個腫瘤轉(zhuǎn)移模型，將穩(wěn)定表達熒光素酶的MHCC97H或HCCLM3細胞（RAC3穩(wěn)定過表達或沉默）通過尾靜脈注射到NCG（NOD/ShiLtJGpt-Prkdcem26Cd52Il2rgem26Cd22/Gpt）小鼠中。我們發(fā)現(xiàn)，RAC3過表達使肺部的熒光素酶強度顯著增加，而RAC3敲低則使其降低（圖4D）。裸鼠皮下接種穩(wěn)定過表達RAC3的Huh-7細胞和穩(wěn)定敲低RAC3的HCCLM3細胞。如圖4E所示，RAC3過表達顯著增加第21天的腫瘤質(zhì)量。相反，RAC3敲低顯著降低第14天的皮下腫瘤形成。免疫組化分析證實，在RAC3過表達的腫瘤組織中檢測到高表達的Ki-67，而在RAC3敲低組中則相反（圖S7A、B）。

   此外，qRT-PCR分析顯示，RAC3的敲低導(dǎo)致抗凋亡標(biāo)志物（包括Bcl-2、SNAI1、NFKB1和TWIST1）的表達降低，而在RAC3過表達的Huh-7細胞中則相反（圖4F）。最后，西方印跡分析顯示，RAC3的敲低導(dǎo)致增殖標(biāo)志物PCNA、抗凋亡標(biāo)志物Bcl-2的表達降低，以及caspase介導(dǎo)的凋亡增加，而在RAC3過表達的Huh-7細胞中則相反（圖4G）?？傊?，RAC3在啟動和促進HCC中起著關(guān)鍵作用。

圖4：RAC3促進HCC細胞的惡性表型 

8、RAC3通過上調(diào)NNMT激活cAMP/MAPK/Rap1信號傳導(dǎo)

   為探索RAC3促進HCC進展的機制，我們進行RNA測序結(jié)合蛋白質(zhì)組學(xué)分析，以確定RAC3調(diào)控的基因。在RAC3過表達后，有236個基因和27個蛋白質(zhì)下調(diào)，而226個基因和35個蛋白質(zhì)上調(diào)（圖5A、B）。代表性DEGs以熱圖形式展示（圖5C、D）?；赗NA-seq數(shù)據(jù)的KEGG分析顯示，Rap1信號通路（p=3.16e-2）、MAPK信號通路（p=3.14e-2）和細胞因子-細胞因子受體相互作用（p=5.71e-3）顯著富集（圖5E）?；诘鞍踪|(zhì)組數(shù)據(jù)的KEGG分析顯示，cAMP信號通路（p=1.70e-2）、趨化因子信號通路（p=3.92e-2）和MAPK信號通路（p=5.02e-2）顯著富集（圖5F）。此外，我們對RNA-seq數(shù)據(jù)中的462個DEGs和蛋白質(zhì)組中的62個DEGs進行交集分析，發(fā)現(xiàn)三個基因（GBP1、NAT1和NNMT）共同被RAC3過表達上調(diào)（圖5G）。隨后，我們通過qRT-PCR對這三個基因進行驗證。結(jié)果表明，NNMT在RAC3過表達下的上調(diào)最為顯著，考慮到p值和倍數(shù)變化（圖5H）。先前的研究表明，NNMT在HCC中表達上調(diào)，能夠增強HCC細胞的侵襲和轉(zhuǎn)移，并與預(yù)后不良相關(guān)。此外，NNMT還被報道能夠增強結(jié)直腸癌對ROS誘導(dǎo)凋亡的抵抗。因此，我們假設(shè)NNMT可能作為RAC3介導(dǎo)的HCC進展的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，通過cAMP/MAPK/Rap1信號通路發(fā)揮作用。

   為驗證這一假設(shè)，我們建立一個原位肝HCC模型，通過原位注射穩(wěn)定過表達熒光素酶和RAC3的MHCC97H細胞，并敲除NNMT。我們發(fā)現(xiàn)，NNMT的敲除逆轉(zhuǎn)了RAC3在促進HCC生長中的作用（圖5I、J），并抑制RAC3過表達HCC組織中Ki67和Bcl-2的表達（圖S8A、B）。此外，我們還進行凋亡實驗，驗證NNMT敲除在體外增加了RAC3過表達HCC細胞的凋亡（圖5K）。此外，我們驗證三種NNMT siRNAs的效率，并選擇si1-NNMT進行NNMT拯救實驗（圖S8C）。我們發(fā)現(xiàn)，通過RAC3過表達在HCC細胞中上調(diào)的PRKACB（cAMP信號的關(guān)鍵分子）、p-ERK/ERK（MAPK信號的關(guān)鍵分子）和Rap1b（Rap1信號的關(guān)鍵分子）可以通過NNMT敲除被抑制（圖5L）。此外，西方印跡分析還表明，抗凋亡和EMT標(biāo)志物被RAC3過表達激活，這一作用可以被NNMT敲除所抵消（圖5L）?？傊?，這些結(jié)果表明，RAC3可能作為腫瘤促進因子，通過NNMT激活cAMP/MAPK/Rap1信號通路，從而驅(qū)動肝癌的發(fā)生和HCC的惡性程度。

圖5：RAC3通過上調(diào)NNMT激活cAMP/MAPK/Rap1信號傳導(dǎo)

9、RAC3與SOX6轉(zhuǎn)錄激活NNMT相互作用

   據(jù)報道，RAC3通過與轉(zhuǎn)錄因子相互作用間接激活靶基因的轉(zhuǎn)錄。因此，我們假設(shè)RAC3可能作為轉(zhuǎn)錄共激活因子，增強NNMT的轉(zhuǎn)錄活性，從而促進HCC的進展。因此，我們在過表達RAC3的Huh-7細胞中進行了共免疫沉淀（Co-IP）結(jié)合質(zhì)譜分析，以篩選與RAC3相互作用的轉(zhuǎn)錄因子（表S5）。在與RAC3相互作用的蛋白質(zhì)中，SOX6是僅有的被注釋的轉(zhuǎn)錄因子，且通過Jaspar數(shù)據(jù)庫進一步預(yù)測為NNMT結(jié)合的轉(zhuǎn)錄因子。然后，我們通過Co-IP在HCC細胞系中驗證了RAC3與SOX6之間的相互作用（圖6A）。由于Jaspar數(shù)據(jù)庫中沒有人SOX6的結(jié)合位點，我們預(yù)測了可能結(jié)合到小鼠NNMT啟動子區(qū)域的小鼠SOX6的核心結(jié)合位點（圖6B）。我們發(fā)現(xiàn)兩個小鼠NNMT啟動子的DNA序列與人類同源，可能結(jié)合到SOX6（圖6C，圖S9）。我們突變了這兩個序列（命名為mut 1和mut 2），并設(shè)計兩對引物（target 1和target 2），使用染色質(zhì)免疫沉淀（ChIP）-qPCR檢測這兩個序列（圖6D）。結(jié)果表明，SOX6可以直接結(jié)合到NNMT啟動子（-345/-338 bp）（圖6E）。此外，雙熒光素酶報告基因?qū)嶒灡砻?，RAC3增強SOX6調(diào)節(jié)的NNMT轉(zhuǎn)錄，這一作用可以通過NNMT啟動子mut1（-345/-338 bp）顯著抑制（圖6F）。總之，RAC3作為SOX6的轉(zhuǎn)錄共激活因子，促進NNMT轉(zhuǎn)錄。

圖6：RAC3與SOX6 相互作用以轉(zhuǎn)錄激活 NNMT 

10、靶向RAC3的特異性抑制劑EHop-016抑制HCC進展

   我們隨后研究靶向RAC3的干預(yù)效果。據(jù)報道，小分子抑制劑EHop-016能夠特異性靶向RAC3 GTPase。隨后，我們用不同濃度的EHop-016處理MHCC97H細胞24小時，發(fā)現(xiàn)EHop-016以濃度依賴的方式抑制RAC3的酶活性和NNMT的表達（圖7A）。此外，我們基于RAC3、SOX6和EHop-016的三維（3D）結(jié)構(gòu)進行分子對接，并發(fā)現(xiàn)RAC3與SOX6之間的氫鍵力約為3埃，表明它們之間的結(jié)合很強（圖7B）。此外，EHop-016結(jié)合到RAC3和SOX6的相互作用界面上，表明EHop-016可能通過抑制RAC3的活性來破壞它們的相互作用（圖7C）。為進一步評估EHop-016在體內(nèi)的藥效學(xué)，我們建立一個原位HCC小鼠模型，通過腹腔注射EHop-016和生理鹽水（NC）（圖7D）。我們發(fā)現(xiàn)，經(jīng)過EHop-016處理后，肝臟中熒光素酶的強度和熒光素酶陽性病變的數(shù)量顯著減少（圖7E-G）?？傊?，EHop-016被確定為一種有效的化合物，可用于靶向HCC治療中的RAC3。

圖7：靶向RAC3的EHop-016抑制HCC進展

結(jié)論：

   總之，我們的研究構(gòu)建了一個由五個ARGs組成的HCC患者預(yù)后風(fēng)險模型。我們證明該模型具有高靈敏度和高特異性，為HCC患者的預(yù)后提供一個強有力的新工具。更重要的是，我們發(fā)現(xiàn)RAC3能夠抑制凋亡并促進細胞增殖和侵襲，從而推動HCC的進展，這為HCC的分子機制提供新的見解。通過小分子化合物EHop-016靶向RAC3顯示出對HCC治療的潛在效果。然而，我們的研究仍存在一些局限性：首先，我們將進一步收集并擴大HCC患者隊列，以驗證風(fēng)險模型的可靠性；其次，NNMT介導(dǎo)的RAC3激活通路的分子機制尚未完全明確。

參考文獻：

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