circRNA在糖尿病中介導(dǎo)視網(wǎng)膜血管功能障礙
最新circRNA文章——首次揭示circRNA在糖尿病中介導(dǎo)視網(wǎng)膜血管功能障礙
近期，來自復(fù)旦大學(xué)，南京醫(yī)科大學(xué)的研究人員發(fā)表了題為“Circular Non-Coding RNA HIPK3 Mediates Retinal Vascular Dysfunction in Diabetes Mellitus”（IF=19.3） 的文章，首次揭示circHIPK3在糖尿病引起的視網(wǎng)膜血管功能障礙中的關(guān)鍵作用和調(diào)控機(jī)制。
研究簡介
circRNA已被證明在血管性疾病、神經(jīng)障礙和癌癥中異常表達(dá)，然而其在糖尿病誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮功能紊亂中的作用尚未見報道。作者利用采用qPCR、Sanger測序、northern blot等 檢測糖尿病相關(guān)應(yīng)激的circHIPK3表達(dá)模式。MTT,EdU,transwell 和 matrigel assays體外檢測circHIPK3在視網(wǎng)膜內(nèi)皮細(xì)胞功能中的作用。視網(wǎng)膜胰蛋白酶消化，血管通透性測定，ELISA測定法檢測circHIPK3在視網(wǎng)膜血管功能障礙中的作用。生物信息學(xué)分析、熒光素酶活性分析、RNA pull down、體內(nèi)研究，揭示了circhipk3介導(dǎo)的視網(wǎng)膜血管功能障礙的機(jī)制。最后驗證circhipk3作為miRNA海綿吸附miR-30a-3p，增強(qiáng)VEGFC, FZD4和 WNT2的表達(dá)，參與調(diào)控視網(wǎng)膜血管功能障礙。
研究方案
1、cirRNA的篩選
根據(jù)報道，circHIPK3在人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞（HUVECs）中高表達(dá)。circBase 檢索發(fā)現(xiàn)HIPK3宿主基因可能產(chǎn)生20個circRNA，作者對這些候選的circRNA進(jìn)行PCR鑒定發(fā)現(xiàn)人和小鼠的視網(wǎng)膜內(nèi)皮細(xì)胞各存在4和2個circRNA, RNase R處理后檢測到2個人circRNA和1個小鼠circRNA。最后選擇與小鼠circRNA保守的人circHIPK3進(jìn)行下一步驗證。
2、cirRNA的表達(dá)模式
作者利用qPCR和northern blot，sang測序，結(jié)合RNAse 處理驗證circHIPK3的客觀存在，利用核質(zhì)分離PCR和FISH檢測circHIPK3的亞細(xì)胞定位。并驗證其在糖尿病小鼠模型和高糖細(xì)胞中高表達(dá)。
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