記憶障礙小鼠模型

來源:藥物導(dǎo)致記憶障礙

模式動物品系:SPF級 KM小鼠，健康，雄性，4~6W，體重為30g左右。

實驗分組:實驗分六組：正常對照組、模型組、陽性藥組、受試藥組三個劑量組。

實驗周期:2-3 weeks

建模方法

記憶獲得障礙模型制造：訓(xùn)練前10min 腹腔注射樟柳堿或東莨菪堿5mg/kg BW；

記憶鞏固障礙模型制造：訓(xùn)練前10min 腹腔注射環(huán)已酰亞胺120mg/kg BW；

記憶再現(xiàn)障礙模型制造：重測驗前30min 灌胃30％ 的乙醇10mL/kg BW。

一、被動行為試驗--避暗實驗

原理：

利用小鼠嗜暗的習(xí)性設(shè)計一個裝置，一半是暗室，一半是明室，中間有一小洞相連。暗室底部鋪有通電的銅柵，并與一計時器相連，計時器可自動記錄潛伏期的時間。小鼠進(jìn)入暗室即受到電擊，計時自動停止。

儀器和試劑：

避暗儀：該裝置分明暗兩室。暗室較大，兩室之間有一直徑約3cm的圓洞。兩室底部均鋪以銅柵。暗室底部中間位置的銅柵可以通電，電擊強度可在一旋鈕上任意選擇。一般采用40v電壓（或0.3-0.4mA電流）底部中間位置的銅柵可以通電，電擊強度可在一旋鈕上任意選擇。采用附帶隔音箱和視頻分析系統(tǒng)的儀器。

實驗步驟：

受試樣品對正常小鼠記憶的影響

末次給樣后次日（或一次給樣后1h）開始訓(xùn)練。實驗時將小鼠面部背向洞口放入明室，同時啟動計時器。動物穿過洞口進(jìn)入暗室受到電擊，計時器自動停止，取出小鼠，記錄每鼠從放入明室至進(jìn)入暗室遭電擊所需的時間，此即潛伏期，訓(xùn)練5min，并記錄5min內(nèi)電擊次數(shù)。24h或48h后重作測驗，記錄每只動物進(jìn)入暗室的潛伏期和5min內(nèi)的電擊次數(shù)，并計算5min 內(nèi)進(jìn)入暗室（錯誤反應(yīng)）的動物百分率。以上實驗步驟為記憶獲得過程。停止訓(xùn)練5天后可以在不同的時間進(jìn)行一次或多次記憶消退實驗（即記憶再現(xiàn)過程）。

二、主動行為試驗--Morris水迷宮實驗

原理：

實驗動物被強迫在水箱內(nèi)游泳，觀察并記錄動物尋找到隱藏在水下平臺所需的時間、游泳軌跡及其采用的策略，分析和推斷動物的學(xué)習(xí)、記憶和空間定位等方面的能力。

儀器與試劑：

Morris水迷宮實驗系統(tǒng)由圓形水池、圖像自動采集和處理系統(tǒng)組成。圖像自動采集和處理系統(tǒng)主要由攝像機(jī)、計算機(jī)、圖像監(jiān)視器組成，動物入水后啟動監(jiān)測裝置，記錄動物運動軌跡，實驗完畢自動分析報告相關(guān)參數(shù)。

Morris水迷宮圓形水池為一圓柱形水桶，直徑為120cm（小鼠），高為50-60cm，水池水深為30-40cm，一個圓形平臺直徑約為9cm（小鼠），藏匿于1cm的水面之下。水池的內(nèi)部不得有任何標(biāo)記，在圓桶的上緣等距離地設(shè)東、南、西和北4個標(biāo)記點，作為動物進(jìn)水池的入水點，以這4個入水點在水面和水桶底部的投影點作為參照位點，將水面和水桶部分均等的分為4個象限，按實驗要求，可任意地將平臺設(shè)置于某一象限的中間。適當(dāng)?shù)暮銣卦O(shè)備使水溫保持在23～25℃。水迷宮水池應(yīng)配有良好的注水和排水設(shè)備，水池的位置一旦確定，就不要輕易變動，尤其在同一輪水迷宮的測試中。

水迷宮圖像自動采集和處理系統(tǒng)：自動地采集動物的入水位置、游泳的速度、搜索目標(biāo)的所需時間和運行軌跡等參數(shù)，并可對所采集的各種數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計和分析。

實驗步驟：

連續(xù)給予受試物后，實驗前一天,大鼠自由游泳2min以熟悉環(huán)境，其間引導(dǎo)動物站上平臺10s。次日開始訓(xùn)練，訓(xùn)練期間繼續(xù)給樣。

定位航行試驗：用于測量實驗動物對水迷宮學(xué)習(xí)和記憶獲得的能力。訓(xùn)練天數(shù)依據(jù)動物的學(xué)習(xí)能力確定，每完成4個象限的訓(xùn)練當(dāng)做1個循環(huán)，動物每次從1個象限的入水點入水，將動物面向池壁放入水中，儀器自動記錄動物尋找并爬上平臺的路線圖、動物從入水到找到水下隱蔽平臺并站立其上所需時間(逃避潛伏期)及游泳總路程。如果動物在90s內(nèi)未找到平臺，則需將其引至平臺，這時潛伏期以90s計，讓動物在平臺停留10s后，再放回籠中。如此重復(fù)完成4個象限的試驗，象限選擇和各實驗組動物訓(xùn)練順序應(yīng)隨機(jī)確定或交叉進(jìn)行。直至80-90%以上的動物在規(guī)定時間內(nèi)找到平臺或至少完成3個循環(huán)的試驗，可終止試驗。

空間探索試驗：定位航行試驗結(jié)束5天后，將水下平臺撤除，按照定位航行試驗的方法重復(fù)1個循環(huán)（共4個象限）的試驗，動物每次從1個象限的入水點入水，記錄90s內(nèi)小鼠在水池4個象限中的游泳距離、路徑、時間，據(jù)此推算平臺所在象限數(shù)據(jù)占總距離、總時間的百分比及穿越平臺的次數(shù)，用來反映大鼠對平臺所在位置的空間記憶能力，以判斷動物記憶儲存及提取再現(xiàn)能力。

應(yīng)用：用于記憶獲得障礙、記憶鞏固障礙和記憶再現(xiàn)障礙模型