記憶障礙小鼠模型

來(lái)源:藥物導(dǎo)致記憶障礙

模式動(dòng)物品系:SPF級(jí) KM小鼠，健康，雄性，4~6W，體重為30g左右。

實(shí)驗(yàn)分組:實(shí)驗(yàn)分六組：正常對(duì)照組、模型組、陽(yáng)性藥組、受試藥組三個(gè)劑量組。

實(shí)驗(yàn)周期:2-3 weeks

建模方法

記憶獲得障礙模型制造：訓(xùn)練前10min 腹腔注射樟柳堿或東莨菪堿5mg/kg BW；

記憶鞏固障礙模型制造：訓(xùn)練前10min 腹腔注射環(huán)已酰亞胺120mg/kg BW；

記憶再現(xiàn)障礙模型制造：重測(cè)驗(yàn)前30min 灌胃30％ 的乙醇10mL/kg BW。

一、被動(dòng)行為試驗(yàn)--避暗實(shí)驗(yàn)

原理：

利用小鼠嗜暗的習(xí)性設(shè)計(jì)一個(gè)裝置，一半是暗室，一半是明室，中間有一小洞相連。暗室底部鋪有通電的銅柵，并與一計(jì)時(shí)器相連，計(jì)時(shí)器可自動(dòng)記錄潛伏期的時(shí)間。小鼠進(jìn)入暗室即受到電擊，計(jì)時(shí)自動(dòng)停止。

儀器和試劑：

避暗儀：該裝置分明暗兩室。暗室較大，兩室之間有一直徑約3cm的圓洞。兩室底部均鋪以銅柵。暗室底部中間位置的銅柵可以通電，電擊強(qiáng)度可在一旋鈕上任意選擇。一般采用40v電壓（或0.3-0.4mA電流）底部中間位置的銅柵可以通電，電擊強(qiáng)度可在一旋鈕上任意選擇。采用附帶隔音箱和視頻分析系統(tǒng)的儀器。

實(shí)驗(yàn)步驟：

受試樣品對(duì)正常小鼠記憶的影響

末次給樣后次日（或一次給樣后1h）開始訓(xùn)練。實(shí)驗(yàn)時(shí)將小鼠面部背向洞口放入明室，同時(shí)啟動(dòng)計(jì)時(shí)器。動(dòng)物穿過(guò)洞口進(jìn)入暗室受到電擊，計(jì)時(shí)器自動(dòng)停止，取出小鼠，記錄每鼠從放入明室至進(jìn)入暗室遭電擊所需的時(shí)間，此即潛伏期，訓(xùn)練5min，并記錄5min內(nèi)電擊次數(shù)。24h或48h后重作測(cè)驗(yàn)，記錄每只動(dòng)物進(jìn)入暗室的潛伏期和5min內(nèi)的電擊次數(shù)，并計(jì)算5min 內(nèi)進(jìn)入暗室（錯(cuò)誤反應(yīng)）的動(dòng)物百分率。以上實(shí)驗(yàn)步驟為記憶獲得過(guò)程。停止訓(xùn)練5天后可以在不同的時(shí)間進(jìn)行一次或多次記憶消退實(shí)驗(yàn)（即記憶再現(xiàn)過(guò)程）。

二、主動(dòng)行為試驗(yàn)--Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)

原理：

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物被強(qiáng)迫在水箱內(nèi)游泳，觀察并記錄動(dòng)物尋找到隱藏在水下平臺(tái)所需的時(shí)間、游泳軌跡及其采用的策略，分析和推斷動(dòng)物的學(xué)習(xí)、記憶和空間定位等方面的能力。

儀器與試劑：

Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)由圓形水池、圖像自動(dòng)采集和處理系統(tǒng)組成。圖像自動(dòng)采集和處理系統(tǒng)主要由攝像機(jī)、計(jì)算機(jī)、圖像監(jiān)視器組成，動(dòng)物入水后啟動(dòng)監(jiān)測(cè)裝置，記錄動(dòng)物運(yùn)動(dòng)軌跡，實(shí)驗(yàn)完畢自動(dòng)分析報(bào)告相關(guān)參數(shù)。

Morris水迷宮圓形水池為一圓柱形水桶，直徑為120cm（小鼠），高為50-60cm，水池水深為30-40cm，一個(gè)圓形平臺(tái)直徑約為9cm（小鼠），藏匿于1cm的水面之下。水池的內(nèi)部不得有任何標(biāo)記，在圓桶的上緣等距離地設(shè)東、南、西和北4個(gè)標(biāo)記點(diǎn)，作為動(dòng)物進(jìn)水池的入水點(diǎn)，以這4個(gè)入水點(diǎn)在水面和水桶底部的投影點(diǎn)作為參照位點(diǎn)，將水面和水桶部分均等的分為4個(gè)象限，按實(shí)驗(yàn)要求，可任意地將平臺(tái)設(shè)置于某一象限的中間。適當(dāng)?shù)暮銣卦O(shè)備使水溫保持在23～25℃。水迷宮水池應(yīng)配有良好的注水和排水設(shè)備，水池的位置一旦確定，就不要輕易變動(dòng)，尤其在同一輪水迷宮的測(cè)試中。

水迷宮圖像自動(dòng)采集和處理系統(tǒng)：自動(dòng)地采集動(dòng)物的入水位置、游泳的速度、搜索目標(biāo)的所需時(shí)間和運(yùn)行軌跡等參數(shù)，并可對(duì)所采集的各種數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)和分析。

實(shí)驗(yàn)步驟：

連續(xù)給予受試物后，實(shí)驗(yàn)前一天,大鼠自由游泳2min以熟悉環(huán)境，其間引導(dǎo)動(dòng)物站上平臺(tái)10s。次日開始訓(xùn)練，訓(xùn)練期間繼續(xù)給樣。

定位航行試驗(yàn)：用于測(cè)量實(shí)驗(yàn)動(dòng)物對(duì)水迷宮學(xué)習(xí)和記憶獲得的能力。訓(xùn)練天數(shù)依據(jù)動(dòng)物的學(xué)習(xí)能力確定，每完成4個(gè)象限的訓(xùn)練當(dāng)做1個(gè)循環(huán)，動(dòng)物每次從1個(gè)象限的入水點(diǎn)入水，將動(dòng)物面向池壁放入水中，儀器自動(dòng)記錄動(dòng)物尋找并爬上平臺(tái)的路線圖、動(dòng)物從入水到找到水下隱蔽平臺(tái)并站立其上所需時(shí)間(逃避潛伏期)及游泳總路程。如果動(dòng)物在90s內(nèi)未找到平臺(tái)，則需將其引至平臺(tái)，這時(shí)潛伏期以90s計(jì)，讓動(dòng)物在平臺(tái)停留10s后，再放回籠中。如此重復(fù)完成4個(gè)象限的試驗(yàn)，象限選擇和各實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物訓(xùn)練順序應(yīng)隨機(jī)確定或交叉進(jìn)行。直至80-90%以上的動(dòng)物在規(guī)定時(shí)間內(nèi)找到平臺(tái)或至少完成3個(gè)循環(huán)的試驗(yàn)，可終止試驗(yàn)。

空間探索試驗(yàn)：定位航行試驗(yàn)結(jié)束5天后，將水下平臺(tái)撤除，按照定位航行試驗(yàn)的方法重復(fù)1個(gè)循環(huán)（共4個(gè)象限）的試驗(yàn)，動(dòng)物每次從1個(gè)象限的入水點(diǎn)入水，記錄90s內(nèi)小鼠在水池4個(gè)象限中的游泳距離、路徑、時(shí)間，據(jù)此推算平臺(tái)所在象限數(shù)據(jù)占總距離、總時(shí)間的百分比及穿越平臺(tái)的次數(shù)，用來(lái)反映大鼠對(duì)平臺(tái)所在位置的空間記憶能力，以判斷動(dòng)物記憶儲(chǔ)存及提取再現(xiàn)能力。

應(yīng)用：用于記憶獲得障礙、記憶鞏固障礙和記憶再現(xiàn)障礙模型