雙熒光素酶報(bào)告基因85折促銷

英拜公司雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)系統(tǒng)采用熒火蟲熒光素酶和海腎熒光素酶組成雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)系統(tǒng)。
    實(shí)驗(yàn)中，一個(gè)報(bào)告基因（熒火蟲熒光素酶）活力的改變，與基因表達(dá)的特定實(shí)驗(yàn)條件相關(guān)，而第二個(gè)報(bào)告基因（海腎熒光素酶）的組成性活力提供了內(nèi)對(duì)照，使實(shí)驗(yàn)值可以規(guī)一化。我們?cè)趩喂苤袦y(cè)試兩個(gè)熒光素酶報(bào)告基因，此兩個(gè)熒光素酶報(bào)告基因具有兼容的化學(xué)特性、操作條件、速度、靈敏度、線性范圍和對(duì)儀器參數(shù)的要求。熒火蟲熒光素酶和海腎熒光素酶測(cè)試的組合，提供了雙遺傳報(bào)告基因應(yīng)用的理想測(cè)試系統(tǒng)。我們選用的使螢火蟲和海腎熒光素酶具有最適測(cè)試的靈敏度和穩(wěn)定性。

可檢測(cè)的內(nèi)容:
1、啟動(dòng)子活性和轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)分析實(shí)驗(yàn)
2、microRNA靶基因驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)
3、microRNA-circRNA(lncRNA)靶基因驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)

■雙熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)的組成

1.熒光素酶報(bào)告基因載體

①螢火蟲熒光素酶報(bào)告基因載體 pGL3 Luciferase Reporter Vector 具有螢火蟲熒光素酶報(bào)告基因，但該報(bào)告基因不含啟動(dòng)子，不能表達(dá)螢火蟲熒光素酶。在該報(bào)告基因前導(dǎo)入外來啟動(dòng)子，相應(yīng)轉(zhuǎn)錄因子與外來啟動(dòng)子結(jié)合，影響熒光素酶報(bào)告基因的表達(dá)。我們首先根據(jù)需要檢測(cè)的轉(zhuǎn)錄因子(TF，transcription factor)，選擇與之對(duì)應(yīng)的promotor/TRE(transcription response element)，并將這個(gè)promotor/TRE的啟動(dòng)序列克隆到載體上（位置與報(bào)告基因相鄰），然后將載體質(zhì)粒轉(zhuǎn)入細(xì)胞，如果細(xì)胞內(nèi)TF具有活性，TF與promotor/TRE結(jié)合，熒光素酶報(bào)告基因得到表達(dá)，熒光強(qiáng)度發(fā)生變化；反之，如果細(xì)胞內(nèi)相應(yīng)的TF沒有活性，熒光素酶報(bào)告基因在細(xì)胞內(nèi)不表達(dá)。我們利用靈敏的Bethord 公司的Lumat LB9507熒光檢測(cè)儀來檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)報(bào)告基因的熒光強(qiáng)度，從而對(duì)轉(zhuǎn)錄因子進(jìn)行活性分析。

②海腎熒光素酶報(bào)告基因載體phRL-SV40 Vector 具有海腎熒光素酶報(bào)告基因，該報(bào)告基因含SV40的啟動(dòng)子及增強(qiáng)子，能高水平表達(dá)海腎熒光素酶基因?？勺鳛闄z測(cè)轉(zhuǎn)染頻率的內(nèi)對(duì)照，使實(shí)驗(yàn)值可以規(guī)一化。

2.熒光素酶檢測(cè)系統(tǒng)

熒光素酶檢測(cè)系統(tǒng) Dual-Luciferase?Reporter 1,000 Assay System 借助這一系統(tǒng)，可以對(duì)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行精確的分析。

熒光素酶檢測(cè)儀器 Lumat LB9507熒光檢測(cè)儀 提供在一般實(shí)驗(yàn)中最好的靈敏度及應(yīng)用性。軟件內(nèi)建DLReady雙報(bào)導(dǎo)基因檢測(cè)程序，最適合于報(bào)導(dǎo)基因檢測(cè)的儀器。
◆超靈敏偵測(cè)儀，檢測(cè)極限可達(dá)10-18mole ATP
◆雙管式偵測(cè)室設(shè)計(jì)，提高一倍的實(shí)驗(yàn)效率
◆專利噴射式分注器，準(zhǔn)確加樣的同時(shí)達(dá)到混合樣品的作用

■雙熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)步驟

1.構(gòu)建含promotor/TRE序列的螢火蟲熒光素酶報(bào)告基因載體；

2.檢測(cè)陽(yáng)性菌落，測(cè)序；

3.提取純化不含內(nèi)毒素的重組螢火蟲熒光素酶報(bào)告基因載體；

4.用構(gòu)建好的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞，使用雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)，利用靈敏的Bethord 公司的Lumat LB9507熒光檢測(cè)儀來檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)報(bào)告基因的熒光強(qiáng)度，從而對(duì)轉(zhuǎn)錄因子進(jìn)行活性分析；在我們的檢測(cè)系統(tǒng)中，兩種熒光素酶可在單個(gè)樣品中連續(xù)測(cè)量，連續(xù)兩次的檢測(cè)可在4秒鐘時(shí)間內(nèi)完成，我們檢測(cè)的線性范圍均在10-18摩爾的靈敏度范圍以內(nèi)