熒光定量PCR冰點(diǎn)促銷

          熒光定量PCR檢測

實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)即是在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號實(shí)時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程，最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時熒光定量PCR避免了傳統(tǒng)PCR以終產(chǎn)物檢測定量產(chǎn)生的偏差，提高實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性。該技術(shù)已被廣泛用于檢測細(xì)胞mRNA表達(dá)量的變化、比較不同組織的mRNA表達(dá)差異、驗(yàn)證基因芯片和siRNA干擾的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。 

英拜為您提供的實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)，全部實(shí)驗(yàn)皆使用進(jìn)口試劑完成；主要實(shí)驗(yàn)步驟如下：

1. 設(shè)計并合成Realtime PCR引物。

2. 引物溶解后使用Promega的TaqDNA聚合酶進(jìn)行含SG（SYBR? Green）的PCR反應(yīng)的優(yōu)化。

3. 客戶樣品RNA抽提

4. RNA質(zhì)量檢測
   a． 紫外吸收測定法測定RNA在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，以計算其濃度并評估RNA純度。
   b． 使用甲醛電泳試劑（ambion）進(jìn)行變性瓊脂糖凝膠電泳，檢測RNA純度及完整性。

5. 按照逆轉(zhuǎn)錄酶（Invitrogen或Promega）使用說明將樣品RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。

6. 制備標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品：進(jìn)行相對定量，需要先將樣品的目的基因以及管家基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增，其產(chǎn)物進(jìn)行梯度稀釋用于做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

7. 標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品和待測樣品分別加入到含SG的RealTime PCR反應(yīng)液中（其中TaqBeadTM 熱啟動聚合酶來自Promega公司），進(jìn)行RealTime PCR擴(kuò)增和檢測。

8. 檢測結(jié)果進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)曲線分析，以對待測樣品的目的基因進(jìn)行定量。相對定量實(shí)驗(yàn)需要進(jìn)一步用樣品的目的基因測得值除以管家基因測得值以校正誤差，所得結(jié)果代表某樣品的目的基因相對含量。

9. 提供實(shí)驗(yàn)報告，包括詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方法及實(shí)時熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果及相關(guān)圖表。

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高通量測序：人全基因組重測序、外顯子測序、宏基因組測序、RNA-seq、miRNA-seq、lncRNA-seq、單細(xì)胞測序、CHIP-seq；
DNA水平：SNP檢測、甲基化檢測、CHIP；
RNA水平：、功能分類 PCR芯片、表達(dá)譜基因芯片、實(shí)時熒光定量PCR、原位雜交；
蛋白水平：WB、抗體芯片、免疫組化、免疫熒光；報告基因?qū)嶒?yàn)
細(xì)胞實(shí)驗(yàn)：細(xì)胞培養(yǎng)及轉(zhuǎn)染、干擾及過表達(dá)、細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞遷移、細(xì)胞侵襲；
生物信息學(xué)：芯片數(shù)據(jù)分析、高通量測序分析、 個化分析方案；
SCI協(xié)同服務(wù)：限量實(shí)驗(yàn)整體外包服務(wù)（IF1-10）,SCI評估、潤色、翻譯、調(diào)整等服務(wù)。