Transwell檢測細胞遷移

在現(xiàn)在的科研研究中，最初的研究基本上就是高通量篩選對照組和實驗組的差異表達基因，然后進行大樣本的熒光定量PCR驗證，確定差異基因與某種疾病的相關性。在之后的研究中，我們就要針對差異基因進行干擾或過表達來進行細胞功能實驗。其中通過Transwell進行細胞遷移的檢測是比較重要的方法。
一、服務介紹

細胞遷移是指細胞在接收到遷移信號或感受到某些物質的梯度后而產生的移動。細胞遷移為細胞頭部偽足的延伸、新的黏附建立、細胞體尾部收縮在時空上的交替過程。細胞遷移是正常細胞的基本功能之一，是機體正常生長發(fā)育的生理過程，也是活細胞普遍存在的一種運動形式。胚胎發(fā)育、血管生成、傷口愈合、免疫反應、炎癥反應、動脈粥樣硬化、癌癥轉移等過程中都涉及細胞遷移。檢測細胞遷移能力的實驗包括劃痕實驗和Transwell實驗。

二、實驗原理

細胞劃痕實驗是簡捷測定細胞遷移運動與修復能力的方法，在體外培養(yǎng)皿或平板培養(yǎng)的單層貼壁細胞上，用微量槍頭或其它硬物在細胞生長的中央?yún)^(qū)域劃線，去除中央部分的細胞，然后繼續(xù)培養(yǎng)細胞至實驗設定的時間是一種簡單易行的檢測細胞運動的方法，實驗成本低，可以用來檢測貼壁生長腫瘤細胞的侵襲轉移能力。Transwell的基本原理是將transwell小室放入培養(yǎng)板中，小室內稱為上室，培養(yǎng)板內稱為下室，上下層培養(yǎng)液以聚碳酸酯膜相隔，上室內添加上層培養(yǎng)液，下室內添加下層培養(yǎng)液。將細胞種在上室內，由于膜有通透性，下層培養(yǎng)液中的成分可以影響到上室內的細胞，從而可以研究下層培養(yǎng)液中的成分對細胞生長、運動等的影響。

三、實驗流程

劃痕實驗

1. 用marker筆在6孔板背后均勻得劃橫線；

2. 在孔中加入細胞；

3. 第二天用槍頭垂至于背后的橫線劃痕；

4. 用PBS洗去處劃下的細胞，培養(yǎng)不同時間，取樣，拍照；

5. 數(shù)據(jù)處理：每個時間點細胞整體遷移距離=每個時間點距離長度-0時距離；

6. 結果統(tǒng)計分析。

Transwell實驗

1. 采用未鋪 Matrigel 膠的 Transwell 小室用于實驗；

2. 制備細胞懸液；

3. 接種細胞；

4. 檢測穿過的細胞數(shù)；

5. 結果統(tǒng)計分析。

四、客戶提供

細胞株(凍存株或培養(yǎng)好的細胞)，所需藥品，藥物處理方式和濃度。

五、公司提供

基本實驗步驟、圖片、數(shù)據(jù)分析結果、剩余藥品。

實驗周期：大約2-3周左右，具體需要根據(jù)細胞生長情況及實驗內容而定。