單細胞實時定量PCR技術(shù)服務

單細胞實時定量PCR技服務
    單細胞qRT-PCR是在單細胞水平上對基因的表達進行實時定量分析的技術(shù)。常規(guī)的qRT-PCR所得結(jié)果是數(shù)以百萬計的細胞的平均水平，只能說明基因在一個細胞群中大致的表達情況。由于細胞的異質(zhì)性，相同組織的單個細胞實際上可能彼此不同，并扮演不同的角色。單細胞qRT-PCR技術(shù)不僅避免了組織水平分析時造成的異質(zhì)細胞干擾,使得基因表達研究更加精細、準確，而且還能夠檢測導致細胞分型甚至細胞間惟一差別的表達特征，因而獲得了極大關(guān)注。
    單細胞qRT-PCR技術(shù)為從單核苷酸水平深入研究癌癥發(fā)生、發(fā)展機制及其診斷、治療提供了新的研究思路并開辟了新的研究方向。近年來，該方法還被廣泛應用于組織器官內(nèi)細胞基因組的異質(zhì)性研究、干細胞的異質(zhì)性研究、以及臨床指導的病理研究等各個方面。
 

實驗流程：
    由于單個細胞中的mRNA數(shù)量很少,大約只有1 pg左右,因而與常規(guī)的RT-PCR相比,單細胞RT-PCR在各個環(huán)節(jié)上都有著顯著差異。常規(guī)RT-PCR首先要將組織中的mRNA或總RNA抽提出來之后才能進行后續(xù)步驟,單細胞RT-PCR顯然無法進行抽提步驟,因而在獲取單個細胞后,在適當體積的裂解液中將細胞裂解,然后直接以裂解產(chǎn)物為模板進行RT-PCR。由于沒有抽提,裂解產(chǎn)物中含有蛋白質(zhì)、RNA以及基因組DNA等各種成分,蛋白質(zhì)因其量極其稀少,可以忽略對單細胞RT-PCR的影響,但裂解產(chǎn)物中的基因組DNA相對于mRNA卻有可能造成極大的干擾。避免這一影響有兩種處理,一是在進行逆轉(zhuǎn)錄之前先用DNAaseⅠ消化基因組DNA,另一種方法就是在設計PCR引物時盡量使引物結(jié)合序列跨越相鄰外顯子的結(jié)合處。

參考文獻：
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