lncRNA與病毒感染的套路
長非編碼RNA（lncRNA）參與各種生物學(xué)和病理學(xué)過程。乙型肝炎病毒(HBV)是一種具有部分雙鏈的DNA病毒，可發(fā)展為慢性肝炎、肝硬化和肝細(xì)胞癌的危險因素。最近報道表明，某些lncRNA在HBV相關(guān)疾病中起著重要作用。lncRNA與病毒感染的研究套路你曉得嗎？這篇文章為您揭曉。
思維路線：
結(jié)果：
1. HBV感染誘導(dǎo)lncRNA HOTTIP上調(diào)
HBV（+）HCC組織和HCC細(xì)胞中HOTTIP的水平明顯升高，HBV初次感染后HOTTIP升高，而繼發(fā)感染后HOTTIP升高更多。這些結(jié)果表明，HOTTIP在HBV陽性組織和細(xì)胞中上調(diào)。
2. HBV DNA聚合酶通過CREB1誘導(dǎo)HOTTIP表達(dá)
將HOTTIP啟動子克隆到螢光素酶報道載體（HOTTIP-LUC +）中，熒光活性因pHBV1.3的存在而增加，pHBV1.3還增加HOTTIP的mRNA水平，HBV DNA pol（DNA聚合酶）可顯著增加HOTITP的mRNA水平。將HOTTIP啟動子與表達(dá)不同HBV蛋白質(zhì)的質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染Huh7細(xì)胞，檢測它們對HOTTIP表達(dá)的影響，發(fā)現(xiàn)HBV DNA pol確實增加HOTTIP啟動子活動，其他效果不明顯。推定兩個CREB1結(jié)合位點(diǎn)存在于HOTTIP啟動子區(qū)域，Hueb7細(xì)胞中CREB1的過表達(dá)激活HOTTIP啟動子，突變CREB1的結(jié)合位點(diǎn)時，HOTTIP-Luc熒光活性被削弱。CREB1的異位表達(dá)增加Huh7細(xì)胞中HOTTIP mRNA的水平。HBV DNA pol可消除CREB1突變對HOTTIP啟動子活性的促進(jìn)作用。轉(zhuǎn)錄抑制劑Dactinomycin D處理Huh7細(xì)胞后，CREB1 mRNA的穩(wěn)定性增強(qiáng)，提示HBV DNA pol對CREB1的上調(diào)可能是由于CREB1 mRNA穩(wěn)定性增加。這些表明HBV DNA pol綁定并穩(wěn)定CREB1 mRNA以促進(jìn)其翻譯，進(jìn)而誘導(dǎo)HOTTIP表達(dá)。
3. HOTTIP和HBV DNA pol抑制HBV復(fù)制
研究HOTTIP對HBV基因表達(dá)和復(fù)制的影響。螢光素酶報告基因檢測表明，過表達(dá)HOTTIP抑制HBV Enh I / Xp活性，HOTTIP敲低則增加；但是，HBV SP1，Sp2和CP的活性沒有明顯變化。培養(yǎng)上清液中的HBsAg和HBeAg水平在HOTTIP過表達(dá)后減少，在HOTTIP敲低后增加。HOTTIP過表達(dá)的細(xì)胞中HBV pgRNA和總RNA減少，上清液中HBV DNA拷貝減少，DNA復(fù)制中間產(chǎn)物也減少。在HOTTIP敲低后效果相反。這些結(jié)果證明HBV DNA pol促進(jìn)HOTTIP表達(dá)，并且HOTTIP反過來會抑制HBV復(fù)制。HBV DNA pol的過表達(dá)顯著降低HBsAg和HBeAg的水平，降低pgRNA、總RNA和HBV DNA拷貝。這些表明HOTTIP和HBV DNA pol可抑制HBsAg和HBeAg的產(chǎn)生以及HBV基因組復(fù)制。
4. HOXA13表達(dá)與HBV復(fù)制有關(guān)
將pHBV1.3質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到Huh7細(xì)胞中，HOXA13水平升高。HOXA13敲低可提高pHBV1.3轉(zhuǎn)染的Huh7中HBsAg、HBeAg的水平、HBV DNA拷貝水平。HOXA13抑制HBV Enh I / Xp活性，而敲低HOXA13則增強(qiáng)。HOXA13降低DNA復(fù)制中間體的水平。這些表明HOXA13抑制HBsAg、HBeAg的產(chǎn)生和HBV基因組復(fù)制。
5. HOXA13通過與HBV Enh I / Xp結(jié)合來介導(dǎo)HOTTIP對HBV復(fù)制的影響
HOTTIP可通過促進(jìn)肝細(xì)胞中HOXA13的表達(dá)發(fā)揮其功能。HOTTIP過表達(dá)導(dǎo)致HOXA13蛋白質(zhì)和mRNA積累，敲除HOTTIP具有相反作用。探討HOXA13促進(jìn)HBV基因表達(dá)復(fù)制的機(jī)制，發(fā)現(xiàn)HOXA13過表達(dá)抑制HBV Enh I / Xp活性，突變HOXA13結(jié)合位點(diǎn)消除對HOTTIP和HOXA13對Enh I / Xp活性的刺激作用。這些證明HOXA13通過直接綁定到Enh I / Xp以介導(dǎo)HOTTIP對HBV病毒蛋白產(chǎn)生和復(fù)制。
