CTNNB1突變型肝細(xì)胞癌中靶向MMP9 可恢復(fù)CD8+ T細(xì)胞介導(dǎo)的抗腫瘤免疫并提高抗PD-1功效

欄目:最新研究動態(tài) 發(fā)布時(shí)間:2024-09-30
CTNNB1GOF通過激活MMP9的分泌引起抑制性TIME,針對MMP9重塑TIME并增強(qiáng)CTNNB1GOF HCC中抗PD-1的療效......

 

         在肝細(xì)胞癌(HCC)中,功能增強(qiáng)(GOFCTNNB1突變(CTNNB1GOF)引起明顯的免疫逃逸,并對抗PD-1產(chǎn)生抗藥性。在這里,我們的目標(biāo)是調(diào)查CTNNB1GOF HCC介導(dǎo)的免疫逃逸機(jī)制,并提出一種新的治療策略,以增強(qiáng)在HCC中抗PD-1的療效。進(jìn)行RNA測序以識別與免疫逃逸相關(guān)的CTNNB1GOF的關(guān)鍵下游基因。利用體外共培養(yǎng)系統(tǒng)、小鼠皮下或正位模型、在條件基因敲除小鼠中的自發(fā)性腫瘤模型以及流式細(xì)胞術(shù),探索基質(zhì)金屬蛋白酶9MMP9)在腫瘤進(jìn)展和免疫逃逸中的生物學(xué)功能。利用單細(xì)胞RNA測序和蛋白質(zhì)組學(xué)來深入了解MMP9的潛在機(jī)制。CTNNB1GOF HCC中,MMP9顯著上調(diào)。MMP9抑制了CD8+ T細(xì)胞的浸潤和細(xì)胞毒性,這對于CTNNB1GOF引發(fā)抑制性腫瘤免疫微環(huán)境(TIME)和抗PD-1抗性至關(guān)重要。從機(jī)制上講,CTNNB1GOF下調(diào)了sirtuin 2SIRT2),導(dǎo)致促進(jìn)β-連環(huán)蛋白/賴氨酸去甲基酶4DKDM4D)復(fù)合物形成,促進(jìn)MMP9的轉(zhuǎn)錄激活。HCC分泌的MMP9介導(dǎo)了CD8+ T細(xì)胞中slingshot蛋白磷酸酶1SSH1)的脫落,導(dǎo)致抑制C-X-C motif趨化因子受體3CXCR3)介導(dǎo)的G蛋白偶聯(lián)受體內(nèi)的信號傳導(dǎo)。此外,MMP9阻斷重塑了TIME,并增強(qiáng)了在HCC中抗PD-1療法的敏感性。CTNNB1GOF通過激活MMP9的分泌引起抑制性TIME。針對MMP9重塑TIME并增強(qiáng)CTNNB1GOF HCC中抗PD-1的療效。

         該研究于202312月發(fā)表在《Gut》,IF24.5

技術(shù)路線:

結(jié)果:

1、MMP9 CTNNB1GOF HCC 中表達(dá)上調(diào)

         為了識別由CTNNB1GOF驅(qū)動的激活基因,我們通過流體動力學(xué)尾靜脈注射(HTVi)激活的AKT/β-連環(huán)蛋白、c-Met/β-連環(huán)蛋白和c-Myc/β-連環(huán)蛋白的三種HCC模型構(gòu)建了具有CTNNB1GOF背景的三種類型。ΔN90-β-連環(huán)蛋白質(zhì)通過HTVi與另一個(gè)致癌基因質(zhì)結(jié)合,促使肝臟中的腫瘤發(fā)生。然后,使用流式細(xì)胞儀(FCM)和t-分布式隨機(jī)鄰域嵌入(t-SNE)分析對肝臟免疫微環(huán)境進(jìn)行了分析。與先前的報(bào)告一致,在CTNNB1GOF HCC中,巨噬細(xì)胞和骨髓源性抑制性細(xì)胞的浸潤增加,而DCs、CD8+CD4+ T細(xì)胞減少(圖1A–C)。與此同時(shí),CD8+ Granzyme B+ T細(xì)胞減少,表明CTLs的細(xì)胞毒性受損。由于腫瘤負(fù)擔(dān)較高,實(shí)驗(yàn)組的總生存期(OS)縮短。隨后,對三對模型進(jìn)行了RNA-seq。韋恩圖顯示了3個(gè)上調(diào)基因(MMP9PROCR、ZFP287)的重疊(折疊變化(FC>1.0p<0.05)(圖1D)。為了識別與免疫調(diào)節(jié)和不良預(yù)后相關(guān)的核心基因,我們通過在癌癥基因組學(xué)數(shù)據(jù)庫(TCGA)數(shù)據(jù)集中使用蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)(PPI網(wǎng)絡(luò))和單變量COX回歸對ImmuneScoreStromalScore篩選的差異表達(dá)基因(DEGs)進(jìn)行了分析。結(jié)果,確定了五個(gè)基因(CXCL5、MMP9、PLAUR、CLEC5AITGB6)(圖1E)。這兩個(gè)基因集的交集確定MMP9是潛在的CTNNB1GOF驅(qū)動基因,可能在HCC中重塑TIME。然后,驗(yàn)證了MMP9CTNNB1GOF腫瘤中高表達(dá)(圖1F)。

         MMP9在多個(gè)基因表達(dá)均衡數(shù)據(jù)庫中都被證實(shí)在HCC中上調(diào)。此外,根據(jù)Lu的單細(xì)胞測序數(shù)據(jù),肝細(xì)胞中MMP9HCC進(jìn)展過程中呈最顯著升高(圖1G)。此外,我們使用國際癌癥基因組學(xué)聯(lián)盟數(shù)據(jù)集中的21基因特征調(diào)查了CTNNB1的活化狀態(tài)。結(jié)果顯示,在CTNNB1突變的活躍狀態(tài)下,MMP9上調(diào)(圖1H)。MMP9CTNNB1GOF HCC中的上調(diào)也在同濟(jì)隊(duì)列中觀察到(圖1IJ)。與此同時(shí),CTNNB1GOFMMP9高表達(dá)的腫瘤與更差的生存和較低的無病生存率相關(guān)(圖1K)。這些結(jié)果表明MMP9CTNNB1GOF HCC中上調(diào),并與不良預(yù)后相關(guān)。


 

 

2、MMP9通過誘導(dǎo)抑制性的免疫微環(huán)境(TIME)促進(jìn)HCC的進(jìn)展

         基因集富集分析(GSEA)顯示MMP9表達(dá)與TCGA-LIHC數(shù)據(jù)集中的抑制性免疫微環(huán)境(TIME)相關(guān)。MMP9在體外和BALB/c裸鼠的腫瘤增殖中幾乎沒有影響(圖2A)。然而,MMP9的敲低顯著減少了C57BL/6 J小鼠的腫瘤體積和重量(圖2B)。對兩組小鼠脾臟的流式細(xì)胞儀(FCM)分析確認(rèn),盡管T淋巴細(xì)胞的比例相近,但在BALB/c裸鼠中成熟的CD4+CD8+ T細(xì)胞幾乎不存在。

         接下來,使用MMP9敲低處理的Hepa1-6細(xì)胞構(gòu)建了原位HCC模型,結(jié)果顯示明顯抑制了腫瘤形成并改善了生存(圖2C–E)。FCM分析顯示MMP9敲低組中總T淋巴細(xì)胞、CD8+CD4+ T細(xì)胞增加,而巨噬細(xì)胞減少(圖2FG)。同時(shí),CD8+ T細(xì)胞中Granzyme B和干擾素γIFN-γ)的增加表明CTLs的細(xì)胞毒性增強(qiáng)(圖2H)。免疫組化(IHC)和多重免疫熒光(mIF)分析進(jìn)一步證實(shí)了這些結(jié)果。盡管巨噬細(xì)胞的總數(shù)減少,但M2表型向M1表型的轉(zhuǎn)變得以觀察(圖2I)。隨后的分析顯示CD8+ T細(xì)胞中PD-1T細(xì)胞免疫球蛋白和黏液結(jié)合域-3TIM-3)減少(圖2J)。此外,使用CD44CD62L標(biāo)記CD8+CD4+ T細(xì)胞的結(jié)果表明,在MMP9敲低后,免疫記憶反應(yīng)水平提高(圖2J)。總的來說,這些發(fā)現(xiàn)表明MMP9通過誘導(dǎo)抑制性的TIME促進(jìn)了HCC的進(jìn)展。


 

 

3、MMP9 抑制 CD8+ T 細(xì)胞的激活和遷移

         考慮到在MMP9下調(diào)后T淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞極化均發(fā)生了變化,我們通過消除CD4+ T細(xì)胞、CD8+ T細(xì)胞或巨噬細(xì)胞來進(jìn)一步確定MMP9調(diào)控的特定免疫細(xì)胞亞群。分別使用抗CD4中和抗CD8中和抗補(bǔ)體進(jìn)行原位HCC模型處理(圖3A)。通過FCM監(jiān)測清道夫的效果(圖3B)。CD8+ T細(xì)胞的消耗剝奪了MMP9下調(diào)的抑制腫瘤效果,導(dǎo)致更重的腫瘤負(fù)擔(dān)和縮短的生存期(圖3C–E)。相反,CD4+ T細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的消耗無法恢復(fù)腫瘤生長。這些結(jié)果確認(rèn)了抑制CD8+ T細(xì)胞對于MMP9促進(jìn)腫瘤進(jìn)展至關(guān)重要。

         為了揭示MMP9CD8+ T細(xì)胞激活的影響,進(jìn)行了體外共培養(yǎng)研究。小鼠脾臟CD8+ T細(xì)胞受到重組MMP9蛋白的刺激,并與Hepa1-6細(xì)胞共培養(yǎng)24小時(shí)(圖3F)。CD8+ T細(xì)胞的腫瘤毒性在MMP9刺激下呈劑量依賴性減弱(圖3G)。CD8+ T細(xì)胞在MMP9刺激下的細(xì)胞培養(yǎng)上清Elisa測定顯示,MMP9抑制了肌酸酶B、干擾素γ和腫瘤壞死因子αTNF-α)的分泌(圖3H)。為了描繪MMP9CD8+ T細(xì)胞遷移中的作用,將腫瘤條件培養(yǎng)基(CM)添加到下層培養(yǎng)皿,并評估CD8+ T細(xì)胞向下層培養(yǎng)皿的遷移(圖3I)。結(jié)果表明MMP9抑制了CD8+ T細(xì)胞的趨化作用(圖3I)。此外,MMP9不影響CD8+ T細(xì)胞的增殖(圖3J)??偟膩碚f,這些觀察結(jié)果表明MMP9阻礙了CD8+ T細(xì)胞的激活和遷移,導(dǎo)致了抑制性的免疫微環(huán)境。


 

 

4、MMP9 阻斷可改善 CTNNB1GOF HCC 中的 TIME 并增強(qiáng)抗 PD-1 功效

         基于抗PD-1的免疫療法已廣泛用于HCC治療,并且已報(bào)道腫瘤浸潤的CD8+ T細(xì)胞是抗PD-1療法的生物標(biāo)志物。鑒于MMP9CD8+ T細(xì)胞的影響,我們推測MMP9的阻斷可能增強(qiáng)抗PD-1療法的療效。

         為了評估MMP9阻斷對CTNNB1GOF HCC中抗PD-1療效的影響,我們在MMP9肝細(xì)胞條件敲除小鼠(MMP9F/F; MMP9-Alb-cre,以下簡稱MMP9Δhep)中構(gòu)建了CTNNB1GOF自發(fā)性腫瘤模型。在腫瘤形成后,一部分小鼠接受了抗PD-1抗體治療(圖4A)。通過肝形態(tài)學(xué)、H&E染色和免疫組織化學(xué)(IHC)的驗(yàn)證,所有小鼠均被確定為攜帶CTNNB1GOFHCC模型(圖4B)。值得注意的是,與其他組相比,接受抗PD-1抗體治療的MMP9Δhep小鼠顯示出顯著的腫瘤抑制和生存延長(圖4C,F)。流式細(xì)胞儀分析顯示,與其他組相比,接受抗PD-1治療的MMP9Δhep小鼠CD8+細(xì)胞顯著增加(圖4D)。CD8+ T細(xì)胞中Granzyme BIFN-γ的增加表明CTLs的細(xì)胞毒性增強(qiáng)(圖4E)。此外,聯(lián)合治療組的多器官未觀察到病變,表明MMP9阻斷和抗PD1的聯(lián)合治療總體上是安全的。血常規(guī)和血生化分析顯示,聯(lián)合治療有效緩解了腫瘤負(fù)擔(dān)引起的肝臟和腎臟損傷。

         我們進(jìn)一步引入了MMP-9-in-1,一種特異的MMP9抑制劑,選擇性靶向血漿蛋白飽和度(PEX)。類似地,MMP-9-in-1與抗PD-1聯(lián)合治療CTNNB1GOF HCC模型(圖4G)。一致地,與MMP-9-in-1或抗PD-1單獨(dú)治療相比,聯(lián)合治療導(dǎo)致更為顯著的腫瘤回歸和生存延長(圖4H1L)。流式細(xì)胞儀分析顯示,聯(lián)合治療增強(qiáng)了CD8+ T細(xì)胞的浸潤和細(xì)胞毒性(圖4JK)。聯(lián)合治療的安全性也通過相同的方式得到驗(yàn)證。

         這些結(jié)果表明,MMP9阻斷有潛力重塑CTNNB1GOF HCC的免疫微環(huán)境,并增強(qiáng)對抗PD-1治療的敏感性。


 

 

5、β-連環(huán)蛋白介導(dǎo)的 SIRT2 抑制通過促進(jìn) β-連環(huán)蛋白/KDM4D 復(fù)合物的形成上調(diào) MMP9

         我們進(jìn)一步研究了β-catenin調(diào)控MMP9的精確機(jī)制。在組裝轉(zhuǎn)錄復(fù)合物之前,β-catenin與各種蛋白相互作用形成不同的蛋白復(fù)合物,執(zhí)行不同的功能。據(jù)報(bào)道,KDM4Dβ-catenin相互作用,導(dǎo)致MMP9啟動子上H3K9me3的去甲基化。SIRT2可以直接與β-catenin相互作用,抑制Wnt信號輸出,而抑制Wnt/β-catenin信號增強(qiáng)SIRT2啟動子活性。我們發(fā)現(xiàn)XAV939通過激活Wnt/β-catenin信號途徑促進(jìn)了KDM4D的表達(dá),并以劑量依賴和時(shí)間依賴的方式抑制了SIRT2的表達(dá)(圖5A,B)。共免疫沉淀(CoIP)結(jié)果驗(yàn)證了β-cateninKDM4DSIRT2的結(jié)合(圖5CD)。免疫熒光證實(shí)了在Hepa1-6細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中β-cateninKDM4DSIRT2的共定位(圖5E)。

         基于以上觀察,我們假設(shè)SIRT2KDM4D可能與β-catenin競爭結(jié)合。CoIP結(jié)果表明,SIRT2的過表達(dá)顯著抑制了β-cateninKDM4D的結(jié)合(圖5FG)。此外,在KDM4D過表達(dá)的Hepa1-6細(xì)胞中,SIRT2的過表達(dá)限制了MMP9的上調(diào)(圖5H)。隨后,通過KDM4D敲除或SIRT2過表達(dá)誘導(dǎo)的MMP9蛋白的下調(diào)在laduviglusib的刺激下被逆轉(zhuǎn)(圖5IJ)。此外,KDM4D敲除或SIRT2過表達(dá)抑制了MMP9的表達(dá),并導(dǎo)致TIME的激活,從而抑制了腫瘤的形成(圖5K–M)。這些結(jié)果表明,通過β-catenin抑制SIRT2促進(jìn)了β-catenin/KDM4D復(fù)合物的形成,從而通過上調(diào)MMP9促使抑制性TIME的形成。


 

 

6、MMP9 抑制 CTNNB1GOF HCC CD8+ CXCR3+ T 細(xì)胞的浸潤

         接下來,我們進(jìn)行了scRNA-seq以探討MMP9在重塑TIME方面的機(jī)制。利用熒光激活細(xì)胞分選(FACS)從MMP9F/FMMP9Δhep小鼠的CTNNB1GOF HCC組織中分離腫瘤CD45+細(xì)胞。對總CD45+細(xì)胞群體的無監(jiān)督統(tǒng)一流形逼近和投影(UMAP)分析確定了23個(gè)亞群(圖6A)。所確定的免疫細(xì)胞群體包括T細(xì)胞、髓樣細(xì)胞、NK細(xì)胞、B細(xì)胞、DCs和中性粒細(xì)胞。所有細(xì)胞都表達(dá)高水平的家庭基因ACTB,而免疫細(xì)胞是PTPRC+AFP,表明我們的數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。這些細(xì)胞亞型在MMP9F/FMMP9Δhep小鼠中是共享的(圖6A)。鑒于髓樣細(xì)胞的大比例,我們進(jìn)行了單獨(dú)的分析以確定髓樣和非髓樣細(xì)胞的比例(圖6B)。

         在先前建立了MMP9在促進(jìn)CD8+ T細(xì)胞依賴性HCC中的作用后,我們對CD8+ T細(xì)胞進(jìn)行了無監(jiān)督聚類分析。結(jié)果揭示了六個(gè)不同的CD8+ T細(xì)胞亞型,即CD8 MKI67、CD8 CCR7CD8 GZMM、CD8 CXCR3、CD8 PDCD1CD8 ITGA4(圖6C)。特別是,MMP9Δhep樣本顯示了CD8 CXCR3細(xì)胞的最顯著增加(圖6D)。我們觀察到CD8 CXCR3細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄譜與已報(bào)道的與效應(yīng)T細(xì)胞功能相關(guān)的CD8 CX3CR1細(xì)胞一致。隨后,我們研究了CD8+ T細(xì)胞的動態(tài)免疫狀態(tài)。偽時(shí)間分析顯示,過渡過程始于CD8 CCR7細(xì)胞,通過以CD8 GZMMCD8 CXCR3細(xì)胞為特征的中間細(xì)胞毒狀態(tài),最終導(dǎo)致以CD8 PDCD1CD8 ITGA4細(xì)胞為特征的增殖(CD8 MKI67細(xì)胞)或衰竭(圖6E)。為了進(jìn)一步描繪過渡狀態(tài),我們分別分析了來自MMP9F/FMMP9Δhep樣本的CD8+ T細(xì)胞的軌跡。令人驚訝的是,CD8 CXCR3細(xì)胞主要分布在MMP9Δhep樣本中(圖6F,G)。因此,我們得出結(jié)論,MMP9敲除主要影響CD8+ CXCR3+ T細(xì)胞的浸潤和功能。這一結(jié)果得到了mIF染色實(shí)驗(yàn)的進(jìn)一步支持,確認(rèn)了MMP9Δhep樣本中CD8+CXCR3+ T細(xì)胞的富集(圖6H)。基因本體論(GO)和基因組的京都百科全書(KEGG)通路富集分析表明,CD8+CXCR3+ T細(xì)胞特異地富集于G蛋白偶聯(lián)趨化因子受體活性、調(diào)節(jié)T細(xì)胞激活、白細(xì)胞遷移和細(xì)胞黏附等方面(圖6I)。


 

 

7、MMP9 通過蛋白水解 SSH1 CD8+ T 細(xì)胞中脫落抑制 CXCR3 介導(dǎo)的 GPCR 細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)

         我們假設(shè)MMP9介導(dǎo)了對CD8+ T細(xì)胞表面蛋白的裂解,從而抑制了GPCR介導(dǎo)的CXCR3內(nèi)部信號傳導(dǎo)。蛋白質(zhì)組學(xué)鑒定了在MMP9刺激后CD8+ T細(xì)胞中下調(diào)的26種蛋白質(zhì)(圖7A),這些蛋白質(zhì)富集于GTP酶活性、GDP磷酸酶活性、調(diào)節(jié)細(xì)胞質(zhì)鈣離子濃度和細(xì)胞遷移等過程(圖7B)。GSEA進(jìn)一步證明MMP9刺激與多種膜轉(zhuǎn)運(yùn)過程相關(guān)聯(lián)(圖7C)。同樣,MMP9抑制了CD8+ T細(xì)胞中CXCR3介導(dǎo)的ERKAKT的磷酸化(圖7D)。與未受MMP9刺激的T細(xì)胞相比,受MMP9刺激的CD8+ T細(xì)胞的F-actin分散在細(xì)胞外緣,而在T細(xì)胞的前緣積聚(圖7E)。這些數(shù)據(jù)表明MMP9抑制了GPCRCXCR3介導(dǎo)的內(nèi)部信號傳導(dǎo)。此外,在MMP9刺激下,促進(jìn)定向細(xì)胞遷移和T細(xì)胞對抗原刺激的SSH1CD8+ T細(xì)胞中顯著降低(圖7A,D)。 MMP9SSH1之間觀察到的負(fù)相關(guān)提示了MMP9SSH1裂解中的潛在作用。

         進(jìn)一步研究了SSH1CD8+ T細(xì)胞中的作用。CoIP和免疫熒光染色表明SSH1可以與CXCR3結(jié)合,但在MMP9介導(dǎo)的SSH1裂解時(shí)解離(圖7FG)。在CXCL10刺激下,CD8+ T細(xì)胞中SSH1的敲除抑制了ERKAKT的磷酸化刺激(圖7H),并阻礙了CD8+ T細(xì)胞的激活、遷移和極化(圖7I–L)。此外,SSH1的上調(diào)消除了MMP9誘導(dǎo)的CD8+ T細(xì)胞遷移和激活的抑制作用。總體而言,這些發(fā)現(xiàn)表明MMP9通過裂解CD8+ T細(xì)胞表面的SSH1來阻礙GPCRCXCR3介導(dǎo)的內(nèi)部信號傳導(dǎo)。


 

 

8、MMP9 HCC 免疫治療提供了有價(jià)值的治療靶點(diǎn)和生物標(biāo)志物

         這些研究啟發(fā)我們提出通過靶向MMP9來開發(fā)新的治療方法。開發(fā)了一種新的抗MMP9兔單克隆抗體(mAb),并評估了其在臨床實(shí)踐中的潛在治療價(jià)值。無論是抗PD-1還是抗MMP9單藥療法都在一定程度上抑制了腫瘤生長(圖8A),而聯(lián)合治療則更顯著地抑制了腫瘤生長并延長了生存(圖8AB)。流式細(xì)胞儀分析顯示聯(lián)合治療增強(qiáng)了CD8+ T細(xì)胞的浸潤和細(xì)胞毒性(圖8C)。此外,在治療組中沒有觀察到明顯的毒性,確保了抗MMP9 mAb的安全性??偟膩碚f,這些結(jié)果顯示了抗MMP9 mAb的治療價(jià)值,抗MMP9和抗PD-1的聯(lián)合可能是HCC免疫治療的有前景的策略。

         在臨床上,我們通過肝切除術(shù)或活檢從同濟(jì)醫(yī)院收集了原發(fā)性HCC標(biāo)本進(jìn)行進(jìn)一步的分析。在接受術(shù)后抗PD-1輔助治療的隊(duì)列中(n=38),免疫組化染色結(jié)果顯示,MMP9表達(dá)與β-連環(huán)蛋白和KDM4D呈正相關(guān),而與SIRT2呈負(fù)相關(guān)(圖8D)。tSNE分析顯示,MMP9水平較高的患者腫瘤內(nèi)CD8+CXCR3+T細(xì)胞浸潤減少,CD8+T細(xì)胞細(xì)胞毒性減弱(圖8E)。此外,MMP9表達(dá)水平較高的患者術(shù)后復(fù)發(fā)的可能性較大,與MMP9水平較低的患者相比(圖8F)。類似地,對于接受抗PD-1新輔助治療的患者(n=40),MMP9水平較高導(dǎo)致抑制性TIME和對抗PD-1治療的響應(yīng)率較低(圖8G–K)。


 

 

實(shí)驗(yàn)方法:

         流式細(xì)胞術(shù)、tSNE、RNA-seq、scRNA-seq、免疫印跡、免疫共沉淀、RT-PCR、雙熒光素酶報(bào)告測定、免疫組織化學(xué)、多重免疫熒光染色、構(gòu)建質(zhì)粒、慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞毒性測定、TranswellF-肌動蛋白染色、串聯(lián)質(zhì)量標(biāo)簽 (TMT) 標(biāo)記的蛋白質(zhì)組學(xué)。

參考文獻(xiàn):

         Cai N, Cheng K, Ma Y, et al. Targeting MMP9 in CTNNB1 mutant hepatocellular carcinoma restores CD8+ T cell-mediated antitumour immunity and improves anti-PD-1 efficacy. Gut.