熊果苷通過(guò)FTO/SLC7A11通路抑制鐵死亡減輕脂肪肝
非酒精性脂肪肝（NAFLD）是一種潛在的嚴(yán)重疾病，影響著全球30%的人口，對(duì)人類健康構(gòu)成重大威脅。然而，迄今為止還沒(méi)有安全、有效和適當(dāng)?shù)闹委煼椒ā＝陙?lái)，鐵死亡已成為一種重要的細(xì)胞死亡模式，并被發(fā)現(xiàn)在非酒精性脂肪肝的發(fā)展過(guò)程中起著關(guān)鍵的調(diào)節(jié)作用。在這項(xiàng)研究中，作者發(fā)現(xiàn)一種從熊果樹(shù)中提取的天然抗氧化劑——熊果苷（ARB），能在體內(nèi)和體外抑制鐵突變的發(fā)生并改善高脂飲食誘導(dǎo)的非酒精性脂肪肝。通過(guò)反向?qū)?，作者發(fā)現(xiàn)去甲基化酶脂肪量和肥胖相關(guān)蛋白（FTO）是ARB的潛在靶點(diǎn)。隨后的機(jī)理研究發(fā)現(xiàn)，ARB通過(guò)抑制FTO來(lái)控制SLC7A11基因甲基化。此外，作者還證明了SLC7A11可以緩解非酒精性脂肪肝在體內(nèi)和體外的發(fā)展，FTO/SLC7A11軸是治療非酒精性脂肪肝的潛在治療靶點(diǎn)。具體而言，作者發(fā)現(xiàn)ARB可通過(guò)作用于FTO/SLC7A11通路抑制鐵死亡，從而緩解非酒精性脂肪肝。該研究為非酒精性脂肪肝的治療提供了一種新的方法和理論基礎(chǔ)。本文于2023年12月發(fā)表在《Redox Biology》，IF：11.4。
技術(shù)路線：
主要實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
1.ARB調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)沉積
ARB提取自熊果的葉子，其分子式如圖1A所示。在本研究中，作者通過(guò)油酸和棕櫚酸(OA/PA)處理HepG2細(xì)胞建立了脂質(zhì)沉積的細(xì)胞模型。首先，作者使用CCK-8和劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)ARB對(duì)細(xì)胞活力的影響。我們發(fā)現(xiàn)ARB在濃度高達(dá)100μM時(shí)對(duì)HepG2細(xì)胞活力沒(méi)有影響(圖1B)，且ARB可以降低HepG2細(xì)胞內(nèi)TG水平，在75μM時(shí)效果更明顯(圖1C)。類似地，ARB對(duì)3T3-L1細(xì)胞的細(xì)胞活力無(wú)影響，并降低了細(xì)胞內(nèi)TG水平(圖1)基于這些結(jié)果，作者在后續(xù)實(shí)驗(yàn)中使用了濃度為75μM的ARB。ARB可增加細(xì)胞外TG水平，并顯著降低細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞外TC水平(圖1D-F)。油紅O染色顯示，與OA/PA處理的細(xì)胞相比，ARB處理OA/PA處理的HepG2細(xì)胞可顯著減少細(xì)胞內(nèi)脂滴聚集(圖1G、H)。
接著，作者量化了HepG2細(xì)胞中與脂質(zhì)代謝相關(guān)的基因的表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)ARB處理抑制了CD36和FANS等脂質(zhì)合成基因的表達(dá)，但促進(jìn)了CPT1和MTTP等參與脂質(zhì)分解和脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)基因的表達(dá)（圖1I）。這些發(fā)現(xiàn)共同表明，ARB可減少細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)積累而不影響細(xì)胞活力。
圖1：ARB調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)沉積和鐵死亡
2.ARB通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞能量代謝和氧化應(yīng)激抑制鐵死亡
由于非酒精性脂肪肝的發(fā)生與代謝失調(diào)和氧化應(yīng)激密切相關(guān)，作者接下來(lái)試圖確定ARB是否會(huì)影響能量代謝和氧化應(yīng)激，發(fā)現(xiàn)ARB能明顯增加線粒體的數(shù)量，并提高OA/PA處理細(xì)胞中ATP的水平（圖1J-M）。此外，線粒體膜電位（MMP）檢測(cè)顯示，ARB處理OA/PA處理細(xì)胞后，MMP水平明顯增加（圖1N-O）。同時(shí)，ARB處理導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)GSH、超氧化物歧化酶（SOD）和過(guò)氧化氫酶（CAT）水平升高，Tatol ROS、線粒體ROS和丙二醛（MDA）生成減少。
作者進(jìn)一步研究了ARB對(duì)OA/PA處理的細(xì)胞內(nèi)總鐵（Fe）和亞鐵離子（Fe2+）含量的影響，發(fā)現(xiàn)ARB處理可顯著降低細(xì)胞內(nèi)Fe2+含量（圖1T-V）。此外，鈣黃綠素染色顯示，ARB處理OA/PA處理的HepG2細(xì)胞逆轉(zhuǎn)了單用OA/PA處理后觀察到的細(xì)胞內(nèi)不穩(wěn)定鐵池的增加（圖1W）。
作者發(fā)現(xiàn)，ARB處理可顯著上調(diào)GPX4和SLC7A11等鐵死亡抑制基因的表達(dá)，同時(shí)顯著下調(diào)鐵死亡促進(jìn)基因SAT1的表達(dá)（圖1X）。此外，ARB還能顯著降低血紅素mRNA的表達(dá)水平。Western blot分析表明，ARB處理OA/PA處理細(xì)胞可明顯提高GPX4和SLC7A11蛋白表達(dá)水平（圖1Y-Z）。綜上所述，作者的研究結(jié)果表明，在非酒精性脂肪肝的OA/PA細(xì)胞模型中，ARB可抑制細(xì)胞鐵死亡。
3.ARB減少小鼠脂質(zhì)沉積
為了確定ARB對(duì)小鼠脂質(zhì)沉積的影響，高脂飼料(HFD)喂養(yǎng)的小鼠以1g/kg的劑量給予ARB。飼喂正常飲食的小鼠被認(rèn)為是CON組。實(shí)驗(yàn)過(guò)程的大綱如圖2A所示。
作者發(fā)現(xiàn)，HFD導(dǎo)致體重（圖2B、C）和脂肪比率（圖2E）顯著增加，瘦肉比率（圖2D）降低，而ARB治療HFD喂養(yǎng)的小鼠顯著減輕了這些影響。通過(guò)顯微CT測(cè)量，HFD+ARB組小鼠的脂肪沉積明顯少于HFD組小鼠（圖2F）。與HFD組相比，HFD+ARB組小鼠附睪和皮下脂肪以及肝組織的相對(duì)重量明顯減少（圖2G-K）。H&E和油紅O染色顯示，與HFD組相比，ARB減輕了肝臟的損傷，減少了肝臟中脂質(zhì)的積累，并縮小了附睪脂肪的體積和面積（圖2L-M）。
與HFD小鼠相比，ARB治療HFD小鼠可降低肝臟TG和TC水平以及糞便TG含量（圖2N-O）。此外，ARB能顯著降低HFD引起的血清TG、TC、LDL-H和AST、ALT水平的升高以及HDL-H水平的降低（圖2P-Q）。這些結(jié)果表明，ARB可減輕HFD引起的脂質(zhì)沉積和肝損傷。
為了進(jìn)一步評(píng)估ARB治療對(duì)HFD小鼠糖代謝的影響，作者在ARB治療的第9周和第10周進(jìn)行了GTT和ITT試驗(yàn)。GTT結(jié)果顯示，與HFD小鼠相比，ARB能顯著降低葡萄糖注射后血糖水平的升高，并促進(jìn)血糖水平恢復(fù)到正常水平（圖2R和S）。作者的ITT結(jié)果與GTT數(shù)據(jù)一致（圖2T-U）。研究結(jié)果表明，膳食中補(bǔ)充ARB可以改善HFD誘導(dǎo)的胰島素抵抗。
圖2：ARB可減少小鼠的脂質(zhì)沉積
4.ARB調(diào)節(jié)小鼠的能量代謝和氧化應(yīng)激以改善鐵死亡
ARB治療10周后，作者進(jìn)行了代謝籠試驗(yàn)，以測(cè)量小鼠的能量消耗和體力活動(dòng)。作者發(fā)現(xiàn)，與HFD組相比，HFD+ARB組的二氧化碳產(chǎn)生量和氧氣消耗量明顯更高（圖3A-D）。同樣，HFD+ARB組小鼠的呼吸熵率（RER）和能量消耗也明顯高于HFD組（圖3E-H）。這些影響在黑暗環(huán)境中更為明顯（圖3A-H）。HFD+ARB組小鼠的體力活動(dòng)水平明顯高于HFD組小鼠，而且這種效應(yīng)與飼料攝入量無(wú)關(guān)。這些結(jié)果表明ARB可改善HFD引起的小鼠能量代謝紊亂。
作者進(jìn)一步研究了ARB對(duì)小鼠氧化應(yīng)激的影響，發(fā)現(xiàn)與HFD組相比，ARB可減少ROS和MDA的積累，增加GSH的含量（圖3I-K），這表明ARB可改善HFD誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激。作者還檢測(cè)了肝臟中鐵和Fe2+的含量，發(fā)現(xiàn)HFD導(dǎo)致肝臟中Fe2+含量顯著積累，而鐵含量沒(méi)有明顯變化。然而，在膳食中添加ARB可抑制HFD引起的Fe2+含量增加（圖3L-N），而血清中的鐵含量也呈現(xiàn)類似的趨勢(shì)（圖3O）。
最后，qRT-PCR顯示，與HFD小鼠相比，在HFD小鼠的膳食中添加ARB會(huì)導(dǎo)致抑制鐵死亡的基因（GPX4、SLC7A11）的表達(dá)顯著增加，而促進(jìn)鐵死亡的基因（ACSL4、STA1）的表達(dá)減少（圖3P）。Western blot分析顯示ARB促進(jìn)了GPX4和SLC7A11的表達(dá)（圖3Q-R）。這些研究結(jié)果表明，ARB可改善小鼠的氧化應(yīng)激并減輕鐵死亡。
圖3：ARB通過(guò)調(diào)節(jié)小鼠能量代謝和氧化應(yīng)激，改善鐵死亡
5.FTO是ARB的靶標(biāo)
接下來(lái)，作者利用Discovery Studio進(jìn)行反向?qū)臃治?，試圖確定ARB調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝的潛在機(jī)制。在排除Fit值低于0.6的模型并對(duì)預(yù)測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行去重和生物校正后確定了410個(gè)潛在靶點(diǎn)。為了優(yōu)化靶點(diǎn)的選擇，作者將從GeneCards和Swiss TargetPredicion數(shù)據(jù)庫(kù)中獲得的與非酒精性脂肪肝相關(guān)的靶點(diǎn)與410個(gè)已確定的靶點(diǎn)重疊，確定了16個(gè)可能與ARB對(duì)非酒精性脂肪肝的影響潛在相關(guān)的靶點(diǎn)（圖4A）。在確定的靶點(diǎn)中，前10位靶蛋白包括脂肪量和肥胖相關(guān)蛋白（FTO）、細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶2（CDK2）和糖原合酶激酶-3β（GSK-3β）。作者對(duì)去甲基化酶FTO特別感興趣，因?yàn)橹耙呀?jīng)證明FTO能有效調(diào)節(jié)肝臟脂質(zhì)代謝。因此，作者假設(shè)FTO可能是ARB調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝的潛在靶點(diǎn)。為了驗(yàn)證這一點(diǎn)，作者對(duì)ARB和FTO進(jìn)行了分子對(duì)接，發(fā)現(xiàn)ARB與FTO在Glu234、Tyr106和Arg96處形成了直接的氫鍵相互作用，并與Asp233、His231和His232形成了疏水相互作用（圖4B-E）。這些結(jié)果表明，FTO是ARB的靶標(biāo)，可能介導(dǎo)ARB對(duì)脂質(zhì)代謝的影響。
Western blot分析表明ARB對(duì)FTO蛋白表達(dá)水平?jīng)]有影響，而qRT-PCR分析表明ARB抑制了FTO表達(dá)細(xì)胞中FTO mRNA的表達(dá)。接下來(lái)，作者使用細(xì)胞熱轉(zhuǎn)移試驗(yàn)（CETSA）和可分化結(jié)構(gòu)搜索（DARTS）證實(shí)ARB與FTO結(jié)合（圖4F、G）。
圖4：FTO是ARB的靶點(diǎn)
6.ARB通過(guò)FTO調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)代謝和鐵死亡
FTO會(huì)破壞細(xì)胞的脂質(zhì)代謝和能量代謝，并影響氧化應(yīng)激。作者發(fā)現(xiàn)ARB處理可降低FTO誘導(dǎo)的TG含量增加，但對(duì)過(guò)表達(dá)FTO-mut（去甲基化功能喪失）細(xì)胞中的TG水平?jīng)]有影響（圖5A）。與這些發(fā)現(xiàn)一致的是，油紅O染色顯示ARB處理減少了FTO過(guò)表達(dá)誘導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)脂滴的異常積累，尤其是面積大于40μm2的脂滴（圖5B、C）。同樣，ARB處理可減少FTO誘導(dǎo)的TC水平的增加（圖5D）。這些結(jié)果表明，ARB可能通過(guò)調(diào)節(jié)FTO去甲基化酶的活性來(lái)影響脂質(zhì)代謝物。
FTO過(guò)表達(dá)增加了ROS的積累，而ARB逆轉(zhuǎn)了這些效應(yīng)（圖5E-FE）。此外，ARB處理過(guò)表達(dá)FTO的細(xì)胞可增加GSH、SOD和MDA水平，降低線粒體熒光（圖5G-H）。接下來(lái)作者評(píng)估了FTO過(guò)表達(dá)對(duì)細(xì)胞Fe和Fe2+含量的影響，發(fā)現(xiàn)ARB處理逆轉(zhuǎn)了FTO誘導(dǎo)的Fe2+含量增加（圖5I-K）。作者的鈣黃綠素染色數(shù)據(jù)與這些發(fā)現(xiàn)一致（圖5L-M）?？傊?，這些結(jié)果進(jìn)一步證明了ARB對(duì)脂質(zhì)代謝和鐵死亡的調(diào)節(jié)作用是通過(guò)FTO介導(dǎo)的。
圖5：ARB可調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)代謝和鐵死亡，并通過(guò)抑制FTO促進(jìn)SLC7A11的甲基化修飾。
7.ARB通過(guò)抑制FTO促進(jìn)SLC7A11的m6A甲基化
接下來(lái)，作者使用斑點(diǎn)印跡試驗(yàn)來(lái)確定ARB是否會(huì)影響FTO介導(dǎo)的m6A甲基化修飾。在ARB組中觀察到較高水平的m6A(圖5N)。qRT-PCR分析表明，ARB增加了FTO誘導(dǎo)的鐵死亡抑制基因（如GPX4和SLC7A11）的減少。相反，ARB會(huì)降低促進(jìn)鐵死亡基因的表達(dá)，包括ACSL4和SAT1（圖5O）。由于SLC7A11表達(dá)的減少最為顯著，作者在隨后的實(shí)驗(yàn)中重點(diǎn)研究了SLC7A11。過(guò)表達(dá)FTO導(dǎo)致SLC7A11蛋白表達(dá)水平下降，而過(guò)表達(dá)FTO突變體對(duì)SLC7A11的表達(dá)沒(méi)有影響（圖5P-Q）。接下來(lái)，作者檢測(cè)了SLC7A11的半衰期，發(fā)現(xiàn)ARB處理增加了SLC7A11的半衰期，從而促進(jìn)了其穩(wěn)定性（圖5R）。FTO的過(guò)表達(dá)縮短了SLC7A11的半衰期，而FTO突變則沒(méi)有影響。
為了評(píng)估FTO對(duì)SLC7A11 m6A甲基化的影響，作者使用MeRIP-seq分析和鑒定了SLC7A11的甲基化位點(diǎn)，發(fā)現(xiàn)敲除FTO會(huì)導(dǎo)致SLC7A11的3′-非翻譯區(qū)（3′-UTR）的甲基化增加，而過(guò)表達(dá)FTO會(huì)導(dǎo)致SLC7A11的3′-UTR區(qū)的m6A甲基化減少（圖5T）。此外，MeRIP-qPCR證實(shí)ARB處理促進(jìn)了SLC7A113′-UTR區(qū)域的m6A甲基化（圖5U）。這些發(fā)現(xiàn)表明，ARB介導(dǎo)的FTO抑制促進(jìn)了SLC7A113′-UTR區(qū)的m6A甲基化，從而促進(jìn)了SLC7A11的表達(dá)。
8.ARB通過(guò)影響SLC7A11的表達(dá)來(lái)抑制鐵死亡
接下來(lái)，作者利用與SLC7A11相互作用的鐵死亡特異性激活劑Erastin來(lái)研究SLC7A11在脂質(zhì)代謝和鐵死亡中的作用。研究發(fā)現(xiàn)，Erastin通過(guò)與Gln191形成直接的氫鍵相互作用來(lái)抑制SLC7A11的表達(dá)。用CCK-8試驗(yàn)測(cè)定，發(fā)現(xiàn)ARB可減輕0.1-100μM Erastin處理細(xì)胞24小時(shí)誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡（圖6A）。此外，ARB還降低了10μM Erastin處理細(xì)胞24小時(shí)后誘導(dǎo)的TG（圖6B）和Fe2+（圖6C-E）水平的升高。作者的鈣黃綠素染色數(shù)據(jù)與這些結(jié)果一致（圖6F、G）。為了進(jìn)一步驗(yàn)證研究結(jié)果，接下來(lái)作者研究了鐵死亡抑制劑Ferrostatin-1（Fer-1）對(duì)細(xì)胞活力和脂質(zhì)代謝的影響。作者發(fā)現(xiàn)，1-100nM Fer-1處理細(xì)胞24小時(shí)可提高細(xì)胞活力，而ARB處理則無(wú)明顯影響（圖6H）。同樣，雖然與OA/PA處理的細(xì)胞相比，10nM Fer-1和Fer-1+ARB處理導(dǎo)致細(xì)胞外TG水平下降，但Fer-1和Fer-1+ARB處理之間沒(méi)有觀察到顯著差異（圖6I）。作者的鈣黃綠素染色數(shù)據(jù)也顯示了類似的趨勢(shì)（圖6J和K）。
作者用SLC7A11 siRNA（siSLC7A11）轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞以敲除SLC7A11的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)ARB逆轉(zhuǎn)了siSLC7A11誘導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)TG水平的增加（圖6L）。此外，敲除SLC7A11導(dǎo)致ROS積累和GSH含量降低，而ARB處理可逆轉(zhuǎn)這兩種情況（圖6M-O）。ARB處理抑制了siSLC7A11誘導(dǎo)的Fe2+水平的增加（圖6P-R），而作者的鈣黃綠素染色數(shù)據(jù)也顯示了類似的效果。相反，過(guò)表達(dá)SLC7A11會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)TG水平下降（圖6U）、ROS積累和Fe2+水平下降以及GSH水平上升（圖6V-Z）。siSLC7A11和siSLC7A11+ARB處理組之間沒(méi)有觀察到明顯差異，表明ARB是通過(guò)SLC7A11發(fā)揮作用的。
圖6.ARB影響SLC7A11以抑制鐵死亡。
9.AAV介導(dǎo)的SLC7A11肝過(guò)表達(dá)可減輕小鼠的脂肪肝
為了進(jìn)一步確定SLC7A11對(duì)非酒精性脂肪肝的影響，作者通過(guò)尾靜脈注射將編碼SLC7A11的AAV載體注入小鼠肝臟。然后給小鼠喂食CON或HFD。注射對(duì)照AAV的小鼠也被分為CON組和HFD組。實(shí)驗(yàn)過(guò)程如圖7A所示。10周后，小鼠被人道處死，并測(cè)量肝臟、心臟、脾臟、腎臟和附睪脂肪組織樣本中的SLC7A11蛋白表達(dá)水平。作者的數(shù)據(jù)表明，SLC7A11已經(jīng)在肝臟中成功表達(dá)。Western blot分析進(jìn)一步顯示，與高脂飲食小鼠相比，高脂飲食-SLC7A11小鼠附睪脂肪和腎臟中的SLC7A11蛋白表達(dá)水平顯著增加。
作者發(fā)現(xiàn)，與HFD組相比，HFD-SLC7A11組小鼠的體重和脂肪體積顯著降低，而瘦肉率顯著升高（圖7B-E）。CT掃描也顯示，與HFD小鼠相比，HFD-SLC7A11組的脂肪含量明顯減少（圖7F）。此外，HFD-SLC7A11組小鼠附睪脂肪、皮下脂肪和肝臟的重量也明顯降低（圖7G-K）。此外，與HFD小鼠相比，在HFD小鼠中過(guò)表達(dá)SLC7A11可減少附睪脂肪組織的脂肪含量和面積，并減輕肝臟的組織損傷和脂質(zhì)沉積（圖7L-M）。
與高脂血癥組相比，HFD-SLC7A11小鼠肝臟和血清中的TG和TC水平明顯下降（圖7N-Q）。血清指標(biāo)分析表明，HFD-SLC7A11組與HFD組相比，LDL-C、AST和ALT水平顯著降低，而HDL-C水平顯著升高。這些發(fā)現(xiàn)表明，過(guò)表達(dá)SLC7A11可減輕小鼠的非酒精性脂肪肝。
通過(guò)在治療的第6周和第7周進(jìn)行GTT和ITT測(cè)試，研究了SLC7A11對(duì)小鼠糖代謝的影響。作者的GTT數(shù)據(jù)表明，過(guò)表達(dá)SLC7A11可改善高氟酸小鼠的葡萄糖耐量（圖7R、S）。同樣，作者的ITT數(shù)據(jù)顯示，過(guò)表達(dá)SLC7A11改善了高氟酸小鼠的胰島素抵抗（圖7T-U）。這些發(fā)現(xiàn)表明，SLC7A11在調(diào)節(jié)高纖維食物喂養(yǎng)小鼠的糖代謝和改善胰島素敏感性方面發(fā)揮著有益的作用。
圖7：AAV介導(dǎo)的SLC7A11肝臟過(guò)表達(dá)可減輕小鼠脂肪肝。
10.AAV介導(dǎo)的SLC7A11肝過(guò)表達(dá)可改善能量代謝并減少氧化應(yīng)激
在治療的第8周，使用代謝籠實(shí)驗(yàn)檢測(cè)了SLC7A11的過(guò)表達(dá)對(duì)小鼠能量代謝的影響。過(guò)表達(dá)SLC7A11對(duì)CON小鼠的能量代謝沒(méi)有顯著影響，但對(duì)HFD小鼠的氧氣消耗和二氧化碳產(chǎn)生率有顯著改善（圖8A-D）。我們的RER和能量消耗數(shù)據(jù)與這些發(fā)現(xiàn)一致（圖8E-H）。此外，能量代謝的這些變化在黑暗條件下更為明顯（圖8A-H），并且與飼料攝入量和運(yùn)動(dòng)無(wú)關(guān)（圖S8E-F）。
在CON小鼠肝臟中未觀察到ROS和GSH水平的明顯變化。然而，與HFD小鼠相比，HFD-SLC7A11小鼠肝臟中的ROS水平顯著降低（圖8I），GSH水平顯著升高（圖8J）。與HFD小鼠相比，HFD-SLC7A11小鼠肝臟MDA水平也明顯下降（圖8K）。這些發(fā)現(xiàn)表明，過(guò)表達(dá)SLC7A11可改善高纖維食物喂養(yǎng)小鼠的能量代謝和氧化應(yīng)激。HFD小鼠肝臟中的Fe2+含量明顯高于CON小鼠。然而，與HFD小鼠相比，過(guò)表達(dá)SLC7A11會(huì)導(dǎo)致HFD-SLC7A11小鼠體內(nèi)的Fe2+含量顯著降低（圖8L-N）。血清中的鐵含量也出現(xiàn)了類似的趨勢(shì)（圖8O）。這些結(jié)果表明，在肝臟中過(guò)表達(dá)SLC7A11可改善鐵變態(tài)反應(yīng)。
圖8：AAV介導(dǎo)的SLC7A11肝過(guò)表達(dá)可改善能量代謝并減少氧化應(yīng)激
實(shí)驗(yàn)方法：
Dot blot、MeRIP-qPCR、RIP-qPCR、Western blot、RNA m6A的定量檢測(cè)、分子對(duì)接技術(shù)、代謝籠實(shí)驗(yàn)、質(zhì)粒轉(zhuǎn)染
參考文獻(xiàn)：
Jiang T, Xiao Y, Zhou J, Luo Z, Yu L, Liao Q, Liu S, Qi X, Zhang H, Hou M, Miao W, Batsaikhan B, Damba T, Liang Y, Li Y, Zhou L. Arbutin alleviates fatty liver by inhibiting ferroptosis via FTO/SLC7A11 pathway. Redox Biol. 2023 Dec;68:102963. doi: 10.1016/j.redox.2023.102963. Epub 2023 Nov 16. Erratum in: Redox Biol. 2023 Dec 1;:102974. PMID: 37984229; PMCID: PMC10694775.