Theranostics:利妥昔單抗通過降低外泌體miR-155含量導(dǎo)致風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者丙型肝炎病毒血癥增加
Theranostics:利妥昔單抗通過降低外泌體miR-155含量導(dǎo)致風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者丙型肝炎病毒血癥增加
越來越多的實驗表明生物治療可以有效地改善類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RA）病人的生活質(zhì)量。類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎病人的治療面對的一個重要問題是生物治療引發(fā)的免疫抑制，尤其是慢性病毒性肝炎患者。利妥昔單抗(RTX)是一個嵌合單克隆抗體，特異性靶向人B細胞表面的CD20，導(dǎo)致B細胞衰竭。研究發(fā)現(xiàn)與TNF-α抑制劑相比，RTX增強丙型肝炎病毒（HCV）活性能力更強，然而相關(guān)機制尚不明確。
2018年2月7日Tsai-Ling Liao等人在Theranostics（IF:8.766）發(fā)表的文章《Rituximab may cause increased hepatitis C virus viremia in rheumatoid arthritis patients through declining exosomal microRNA-155》發(fā)現(xiàn)RTX可以引起B細胞耗竭并且影響細胞內(nèi)miR-155的產(chǎn)生和外泌體miR-155的遷移，然后增強肝細胞中HCV活性。研究人員通過體外細胞實驗探究了外泌體miR-155在RTX引起的HCV活性增強中的作用。通過比較接受不同抗類風(fēng)濕治療的HCV感染類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎病人與未受感染的病人或健康人血清中的外泌體含量和外泌體miR-155水平差異，發(fā)現(xiàn)循環(huán)外泌體miR-155含量與HCV病毒載量負相關(guān)，且與RA病人中RTX引起的HCV活性增強有關(guān)。因此，研究人員認為外泌體miR-155可能成為潛在的診斷生物標(biāo)記物或治療靶點。
技術(shù)路線
實驗結(jié)果
RTX可能影響B細胞來源的抗HCV細胞因子（miR-155）向肝細胞的遷移
圖1：RTX可能影響B細胞來源的抗HCV細胞因子（miR-155）向肝細胞的遷移。A)RTX或TNF-α抑制劑（阿達木單抗（ADA），依那西普(ETA)及高利單抗(GOL)）無肝毒性 B）RTX或TNF-α抑制劑不影響HCV在肝細胞的復(fù)制 C）Raji細胞上清抑制HCV復(fù)制，RTX處理Raji細胞可以部分恢復(fù)HCV活性 D) RTX處理的Raji細胞上清可增強HCV復(fù)制能力，該過程具有時間依賴性 E)經(jīng)慢性HCV感染的RA病人外周血細胞中miR-155表達水平顯著增強 F)miR-155過表達抑制肝細胞中HCV復(fù)制。
RTX可能通過減少B細胞來源的miR-155的產(chǎn)生和外泌體miR-155的遷移水平影響肝細胞中HCV的復(fù)制
圖2 A)用共培養(yǎng)體系研究外泌體在B細胞和Huh7-HCV復(fù)制子細胞間通訊中的作用 B)RTX治療引起B細胞的消耗 C)用RTX處理Raji細胞其生存能力沒有明顯變化 D）經(jīng)RTX處理的Raji細胞中miR-155的含量明顯減少 E）經(jīng)RTX處理的細胞中Raji細胞衍生的外泌體miR-155含量顯著降低 F）miR-155從RTX治療的Raji細胞遷移到肝細胞的數(shù)量減少 G)經(jīng)RTX處理后HCV復(fù)制活性增強
3、RTX通過降低B細胞外泌體miR-155表達水平直接影響肝細胞中HCV的復(fù)制
圖3 A）流程圖 B)qRT-PCR結(jié)果顯示RTX處理后的Raji細胞中miR-155含量減少 C) qRT-PCR結(jié)果顯示RTX處理后的Raji細胞外泌體miR-155含量減少 D)RTX處理的Raji細胞外泌體導(dǎo)致肝細胞中miR-155的表達降低 E) RTX處理的Raji細胞外泌體使得肝細胞中HCV復(fù)制活性增強
RTX相關(guān)的HCV血癥增多與RA患者外泌體miR-155含量減少相關(guān)
(1)HCV感染的RA病人血清中外泌體和外泌體miR-155含量增加
圖4 A）免疫印跡結(jié)果表明與正常對照和未感染HCV的RA患者相比，HCV感染的RA患者外泌體含量增加，TNF抑制劑可以增加外泌體含量，而RTX可以降低外泌體含量B)ELISA結(jié)果表明HCV感染的RA患者血清中外泌體的含量增加 C)HCV感染的RA患者的外泌體miR-155含量增加 D)RTX治療的RA病人外泌體miR-155表達顯著降低 E)左圖 RTX比TNF-α抑制劑更大程度地增加了HCV病毒載量 ；右圖 RTX治療的RA病人外泌體miR-155表達顯著降低，而TNF-α抑制劑處理后外泌體miR-155表達沒有明顯差異 F）RTX治療的患者外泌體miR-155表達明顯降低，且呈時間依賴性。
（2）接受RTX治療的HCV感染RA患者的外泌體miR-155表達水平顯著降低
表格1 HCV感染RA患者接受csDMARDs、TNF-抑制劑和rit治療的人口統(tǒng)計學(xué)資料和實驗室研究結(jié)果*
*值是平均值±標(biāo)準(zhǔn)差或者是患者的數(shù)量(%)
CCP胃環(huán)瓜氨酸肽; CRP是C反應(yīng)蛋白; csDMARDs是傳統(tǒng)合成的抗風(fēng)濕性藥物; DAS28是28個關(guān)節(jié)疾病活性評價; ESR為紅細胞沉降速度; HCV是丙型肝炎病毒; NA意為不適用; RF指類風(fēng)濕因子; TNF-α是腫瘤壞死因子α。
結(jié)論
B細胞衍生的miR-155通過影響外泌體遷移抑制HCV復(fù)制
RTX可以誘發(fā)B細胞損耗，影響細胞內(nèi)miR-155的產(chǎn)生和外泌體miR-155的遷移，然后導(dǎo)致肝細胞中HCV活性增強