大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞 RASMC

   血管平滑肌細(xì)胞在血管疾病研究中起到重要作用，并且可以被用來界定治療動(dòng)脈疾病新的治療靶標(biāo)。

   RASMC是從大鼠主動(dòng)脈分離得到的，原代凍存，冰凍運(yùn)輸。每管細(xì)胞密度超過5×10^5/ml。細(xì)胞特性經(jīng)α-平滑肌肌動(dòng)蛋白和肌間線蛋白免疫熒光鑒定。本細(xì)胞經(jīng)檢測不含支原體、細(xì)菌、酵母菌和真菌。如采用ScienCell實(shí)驗(yàn)室提供的實(shí)驗(yàn)條件，可保證此細(xì)胞5倍增增殖。

   方法取SD大鼠胸、腹主動(dòng)脈,用酶液Ⅰ(木瓜蛋白酶等)、酶液Ⅱ(膠原酶和透明質(zhì)酸酶等)酶解分離平滑肌細(xì)胞,酶液Ⅰ、Ⅱ的消化時(shí)間分別選取10、15、20、25、30 min,并兩兩組合以確定最佳消化時(shí)間。分離的細(xì)胞經(jīng)臺(tái)盼藍(lán)染色測定其活性并通過平滑肌特異性α-肌動(dòng)蛋白(α-actin)免疫組化染色鑒定。結(jié)果分離的平滑肌細(xì)胞在倒置顯微鏡下計(jì)數(shù),酶液Ⅰ、Ⅱ的消化時(shí)間分別在30、15 min時(shí)平滑肌細(xì)胞數(shù)量最多為(18.3±1.5)個(gè)/低倍視野,與其他各時(shí)間點(diǎn)組合相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。鏡下觀察典型的平滑肌細(xì)胞呈長梭形,細(xì)胞膜完整,邊緣光滑;臺(tái)盼藍(lán)染色,90%以上的細(xì)胞為活細(xì)胞;免疫組化染色鑒定為平滑肌細(xì)胞。結(jié)論酶消化法分離獲取SD大鼠平滑肌細(xì)胞方法簡單、成本低,采用本法可獲得較大量的平滑肌細(xì)胞供實(shí)驗(yàn)使用。