肥胖與減肥對(duì)癌癥防治的影響：TREM2缺乏在瘦小鼠中獨(dú)特地減弱乳腺癌生長(zhǎng)并改變克隆T細(xì)胞群

         肥胖是乳腺癌發(fā)展和預(yù)后不良的一個(gè)確定的危險(xiǎn)因素。乳腺腫瘤周?chē)闹经h(huán)境在肥胖中被炎癥化，這與腫瘤的進(jìn)展有關(guān)，而髓樣細(xì)胞上表達(dá)的觸發(fā)受體2 （TREM2）是脂肪組織和腫瘤中巨噬細(xì)胞上表達(dá)的跨膜受體，是一個(gè)新興的癌癥治療靶點(diǎn)。為更好地了解肥胖與乳腺癌關(guān)聯(lián)的機(jī)制以及減肥的潛在益處，作者利用瘦、肥胖和減肥小鼠模型來(lái)研究TREM2缺乏對(duì)絕經(jīng)后乳腺癌的影響。TREM2缺乏抑制了瘦小鼠的腫瘤生長(zhǎng)，但在肥胖或減肥小鼠中沒(méi)有效果。腫瘤和腫瘤鄰近乳腺脂肪組織免疫細(xì)胞的單細(xì)胞RNA測(cè)序，結(jié)合可變多樣性連接測(cè)序，揭示了不同模型中免疫景觀的差異。瘦TREM2缺陷小鼠的腫瘤表現(xiàn)出克隆性CD8+ T細(xì)胞從衰竭狀態(tài)向效應(yīng)記憶狀態(tài)的轉(zhuǎn)變，并伴有CD4+ Th1細(xì)胞克隆性的增加，這在任何其他飲食基因型組中都沒(méi)有觀察到。值得注意的是，在同一只小鼠的腫瘤和腫瘤鄰近乳腺脂肪組織中發(fā)現(xiàn)了相同的T細(xì)胞克隆型。最后，抗PD-1治療抑制了瘦小鼠和減肥小鼠的腫瘤生長(zhǎng)，但在肥胖小鼠中沒(méi)有。這些發(fā)現(xiàn)表明，體重史可能影響絕經(jīng)后乳腺癌TREM2抑制的效果。腫瘤和周?chē)窘M織之間的免疫相互作用在肥胖和減肥條件下突出了顯著差異。該文章于2025年4月發(fā)表在《Cancer Research》，IF：12.5。

摘要圖：

主要研究結(jié)果：

1. 絕經(jīng)后乳腺癌的瘦、肥胖和減肥模型

         為了建立絕經(jīng)后乳腺癌的肥胖和減肥模型，選擇了C57BL/6J小鼠品系，因?yàn)樗蟹逝謨A向，并已在代謝研究中建立了應(yīng)用。在6周齡時(shí)，切除小鼠卵巢，以鼠糧喂養(yǎng)2周。隨后，瘦小鼠喂食低脂飼料23至24周，肥胖小鼠喂食低脂飼料12周，然后在研究的剩余時(shí)間內(nèi)改為高脂飼料，減肥小鼠喂食高脂飼料12周，然后再喂食低脂飼料（圖1A）。每周記錄食物攝入量。肥胖和體重減輕可以從身體和oAT質(zhì)量的變化中看出（圖1B和C），終點(diǎn)子宮萎縮證實(shí)卵巢切除術(shù)成功（圖1D）。葡萄糖耐量測(cè)試在11周（任何飲食轉(zhuǎn)換之前）和19周的飲食后進(jìn)行。在服用HFD 11周后，與服用LFD的小鼠相比，減肥組已經(jīng)肥胖，并且表現(xiàn)出更差的葡萄糖耐量。在第19周的時(shí)間點(diǎn)，肥胖組表現(xiàn)出更差的葡萄糖耐量，而減肥小鼠的葡萄糖清除率與瘦對(duì)照組相匹配（圖1E）。20周后注射E0771細(xì)胞，監(jiān)測(cè)腫瘤3周。這種飲食模式賦予了一個(gè)重要的優(yōu)勢(shì)：瘦鼠、肥胖鼠和減肥鼠在注射腫瘤細(xì)胞時(shí)處于相同的年齡，這使得從同一批細(xì)胞注射腫瘤細(xì)胞能夠最大限度地減少實(shí)驗(yàn)差異。這允許在每個(gè)實(shí)驗(yàn)組中同時(shí)監(jiān)測(cè)腫瘤。肥胖小鼠腫瘤體積和腫瘤質(zhì)量顯著增加，而減肥小鼠與瘦組無(wú)顯著差異（圖1F-H）。

圖1 在絕經(jīng)后乳腺癌模型中，減肥可挽救腫瘤生長(zhǎng)

2. 在表達(dá)TREM2的mATTum-adj中，LAM標(biāo)記物上調(diào)并與腫瘤質(zhì)量呈正相關(guān)

         脂肪組織中的LAM與肥胖有關(guān)，并且腫瘤中表達(dá)TREM2的巨噬細(xì)胞的免疫抑制性質(zhì)已被報(bào)道。因此，作者將先前文獻(xiàn)中鑒定的LAM基因在瘦弱、肥胖和減肥小鼠腫瘤中的表達(dá)進(jìn)行了量化。對(duì)腫瘤中的CD11b+細(xì)胞進(jìn)行磁分選（圖2A）。LAM基因在腫瘤來(lái)源的CD11b+細(xì)胞中的表達(dá)在飲食組之間沒(méi)有差異（圖2B）。接下來(lái)，在mATTum-adj和mATContra中對(duì)LAM基因進(jìn)行定量分析（圖2C）。與瘦的mATContra相比，肥胖的mATContra中只有TREM2的表達(dá)增加。然而，與瘦mATTum-adj和減肥mATTum-adj相比，肥胖mATTum-adj的TREM2和Plin2增加。肥胖的mATTum-adj比瘦的mATTum-adj Cd36增加。此外，在肥胖和減肥組中，相對(duì)于mATContra， mATTum-adj中的TREM2、Plin2和Cd36表達(dá)上調(diào)（圖2D-F）。為了確定腫瘤生長(zhǎng)與LAM基因表達(dá)之間是否存在關(guān)系，作者進(jìn)行了mAT LAM基因與腫瘤大小的相關(guān)性分析。在mATContra中，TREM2、Plin2或Cd36的表達(dá)與腫瘤質(zhì)量沒(méi)有相關(guān)性(圖2G和H)；然而，在mATTum-adj中，TREM2和Plin2基因的表達(dá)與腫瘤質(zhì)量呈正相關(guān)（圖2G和H）。

圖2 LAM標(biāo)記基因在肥胖的mATTum-adj中增加，并與腫瘤質(zhì)量呈正相關(guān)

3. 在絕經(jīng)后乳腺癌模型中，TREM2缺乏可降低腫瘤生長(zhǎng)

         在各種癌癥模型中，TREM2缺乏或用抗TREM2單抗治療可降低腫瘤生長(zhǎng)。為了確定TREM2消融是否能減緩絕經(jīng)后乳腺癌的腫瘤生長(zhǎng)，作者切除了TREM2 +/+和TREM2 -/-雌性C57BL/6J小鼠的卵巢，并以鼠糧喂養(yǎng)（圖3A）。正如預(yù)期的那樣，TREM2-/-動(dòng)物血漿中不存在sTREM2（圖3B）?；蛐椭g的體重、葡萄糖耐量（圖3C）或終點(diǎn)oAT和mAT質(zhì)量均無(wú)差異。卵巢切除術(shù)后25周，注射E0771PD-L1細(xì)胞，監(jiān)測(cè)腫瘤4周。所有TREM2-/-小鼠都出現(xiàn)了可觸及的腫瘤，而只有一只TREM2+/+小鼠沒(méi)有。與TREM2+/+對(duì)照組相比，TREM2-/-小鼠的腫瘤體積和腫瘤質(zhì)量均顯著降低（圖3D和E）。TREM2-/-小鼠的oAT中Cd36基因表達(dá)顯著降低，Plin2和Cd9基因表達(dá)略有降低（圖3F）。oAT中M1樣和M2樣巨噬細(xì)胞標(biāo)志物Nos2和Arg1均降低（圖3F）。TREM2-/- mATTum-adj表現(xiàn)出從?。ㄖ睆?span>μm）脂肪細(xì)胞向大（直徑70-99 μm）脂肪細(xì)胞的轉(zhuǎn)變（圖3G-I）。先前關(guān)于雄性附睪脂肪組織的報(bào)道表明，TREM2缺陷小鼠的脂肪細(xì)胞嚴(yán)重肥大；然而，這些數(shù)據(jù)首次表明TREM2缺乏也會(huì)導(dǎo)致女性皮下脂肪組織庫(kù)中的脂肪環(huán)境失調(diào)。

圖3 在經(jīng)周喂養(yǎng)的絕經(jīng)后乳腺癌模型中，TREM2消融可減緩腫瘤生長(zhǎng)，減少LAM，并增加脂肪細(xì)胞肥大

4. TREM2消融術(shù)在瘦弱動(dòng)物中減弱腫瘤生長(zhǎng)，但在肥胖或減肥動(dòng)物中沒(méi)有

         為了評(píng)估在肥胖和體重減輕的情況下TREM2消融對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的影響，將切除卵巢的雌性TREM2 +/+和TREM2 -/-小鼠置于LFD和HFD組，形成瘦、胖和減肥組，并在飲食20周后注射E0771 PD-L1。在每個(gè)飲食組中，基因型之間的體重軌跡沒(méi)有差異（圖4A）。與瘦和減肥TREM2+/+小鼠相比，肥胖TREM2+/+小鼠的血漿中sTREM2水平升高，而TREM2-/-小鼠的血漿中沒(méi)有sTREM2（圖4B）。與瘦TREM2+/+對(duì)照相比，瘦TREM2-/-小鼠的腫瘤生長(zhǎng)減弱，這一點(diǎn)可以通過(guò)終點(diǎn)腫瘤質(zhì)量和體積隨時(shí)間的變化來(lái)證明（圖4C和D）。然而，TREM2缺乏并沒(méi)有減少肥胖或減肥小鼠的腫瘤生長(zhǎng)（圖4C、E和F）。

圖4 瘦但不是肥胖或減肥，TREM2-/-小鼠表現(xiàn)出腫瘤生長(zhǎng)減少

圖5 用scRNA-seq分析腫瘤骨髓群和mATTum-adj

5. scRNA-seq顯示，瘦TREM2-/-小鼠腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞中抗原呈遞基因的表達(dá)增加

         為了探索腫瘤的免疫學(xué)景觀和mATTum-adj，作者對(duì)CD45+免疫細(xì)胞進(jìn)行了scRNA-seq（圖4）。UMAP分析在腫瘤中鑒定了21個(gè)簇，在mATTum-adj中鑒定了33個(gè)簇，顯示了每個(gè)簇的前3個(gè)DEGs。由于TREM2在骨髓細(xì)胞上表達(dá)，來(lái)自?xún)煞N組織的骨髓群體被亞群化并重新聚集（圖5A和B），并計(jì)算了每個(gè)組織內(nèi)每個(gè)細(xì)胞群體的頻率（圖5C和D）。觀察到骨髓群體的一些變化，特別是在瘦TREM2-/-腫瘤中，與瘦TREM2+/+腫瘤相比，Mono_Cd16集群減少，cDC3_Fscn1和Macro_Isg15集群增加（圖5C）。作者的RT-PCR數(shù)據(jù)顯示，整個(gè)腫瘤的TREM2表達(dá)不受肥胖或體重減輕的影響（圖2B）。在作者的scRNA-seq數(shù)據(jù)集中，TREM2主要在Macro_C1qc亞群中表達(dá)，這是一個(gè)更促炎的巨噬細(xì)胞群，參與抗原呈遞，在腫瘤的飲食組之間沒(méi)有變化（圖5E）。然而，在mATTumadj中，肥胖增加了巨噬細(xì)胞中TREM2的表達(dá)，正如在其他脂肪組織庫(kù)中發(fā)生的那樣(圖5F)。在腫瘤Macro_C1qc群體中測(cè)定瘦TREM2+/+和瘦TREM2-/-之間的前5個(gè)deg，隨后在所有實(shí)驗(yàn)組中進(jìn)行評(píng)估（圖5G）。與瘦TREM2+/+組相比，瘦TREM2-/- Macro_C1qc（腫瘤）和LAM （mATTum-adj）群體中，前5個(gè)DEGs中的4個(gè)，H2-Eb1、H2-Ab1、H2-Aa和Cd74相對(duì)增加（圖5H）。這些基因是抗原呈遞的組成部分，這將作者的重點(diǎn)放在T細(xì)胞群上。

6. 克隆T細(xì)胞群在瘦的TREM2-/-小鼠腫瘤中從疲憊狀態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)樾?yīng)狀態(tài)，而不是肥胖或減肥小鼠

         腫瘤T細(xì)胞群的初步分析包括細(xì)胞比例和頻率（圖6A和B），以及腫瘤T細(xì)胞群的亞聚類(lèi)（圖6C）。在瘦小鼠中，與TREM2+/+對(duì)照相比，TREM2-/-腫瘤顯示CD8+ TEM和CD4+ Th1細(xì)胞增加。在肥胖小鼠中，與TREM2+/+相比，這兩種T細(xì)胞群在TREM2-/-中增加；然而，與瘦肉對(duì)照組相比，兩種基因型均表現(xiàn)出明顯降低的細(xì)胞/腫瘤比例。在減肥組中，與飲食匹配的對(duì)照組相比，TREM2-/-中的CD8+ TEM和CD4+ Th1細(xì)胞減少（圖6A和B）。由于T細(xì)胞克隆擴(kuò)增是靶向腫瘤細(xì)胞的必要條件，通過(guò)克隆細(xì)胞計(jì)數(shù)投影到按飲食和基因型分裂的重組腫瘤T細(xì)胞UMAP上，可以看到腫瘤T細(xì)胞的克隆性（圖6D-I）。在瘦TREM2+/+腫瘤中發(fā)現(xiàn)了高度克隆的耗盡CD8+ T細(xì)胞（TEX）群體（圖6D），而瘦TREM2-/-小鼠的腫瘤則含有高度克隆的CD8+ TEM和CD4+ Th1群體（圖6E）。在肥胖動(dòng)物中，總體克隆群體較少；然而，這兩種基因型都含有一些克隆性CD8+ TEX和CD8+ TEM（圖6F和G）。在減肥動(dòng)物中，TREM2+/+腫瘤含有強(qiáng)大的克隆性CD8+ TEX群體，而TREM2-/-腫瘤顯示出總體克隆性顯著降低（圖6H和I）。引人注目的是，在瘦TREM2-/-腫瘤中豐富的高度克隆性CD4+ Th1細(xì)胞在其他飲食基因型組中不存在。這表明這些細(xì)胞可能在抑制瘦TREM2-/-小鼠腫瘤生長(zhǎng)中起關(guān)鍵作用。將T細(xì)胞克隆分成單克隆體和低、中等或高克隆體，增強(qiáng)了瘦TREM2-/-腫瘤中CD4+ Th1細(xì)胞的增加（圖6J）。在瘦和肥胖組中，與飲食匹配的TREM2+/+對(duì)照組相比，克隆水平分組統(tǒng)計(jì)還強(qiáng)調(diào)了TREM2-/-小鼠中高克隆CD8+ TEM的擴(kuò)增；然而，在減肥動(dòng)物中沒(méi)有觀察到這種強(qiáng)勁的擴(kuò)張。考慮到飲食組和基因型組之間腫瘤T細(xì)胞克隆性的巨大差異，并考慮到脂肪組織微環(huán)境的影響，作者接下來(lái)研究了腫瘤和mATTum-adj內(nèi)的克隆型。

圖6 腫瘤T細(xì)胞克隆的可視化和分類(lèi)顯示，在瘦TREM2-/-腫瘤中，高度克隆的CD4+ Th1細(xì)胞擴(kuò)增

圖7 腫瘤及mATTum-adj雙組織克隆的鑒定

7. 腫瘤與mATTum-adj相同克隆型的鑒定

         克隆擴(kuò)增的T細(xì)胞既可以存在于腫瘤組織中，也可以存在于脂肪組織中，但兩者之間是否存在任何共享的克隆是未知的。通過(guò)對(duì)TCRβ的β鏈進(jìn)行測(cè)序，作者根據(jù)互補(bǔ)決定區(qū)3確定了克隆型。T細(xì)胞克隆被分為三組：腫瘤克隆，它們只在腫瘤中被識(shí)別；僅存在于mATTum-adj；和雙組織克隆，通過(guò)在腫瘤和mATTum-adj中存在相同的TCRβ來(lái)鑒定（圖7A）。為了可視化每個(gè)類(lèi)別中代表的T細(xì)胞亞群，在脂肪組織中鑒定的脂肪克隆和雙組織克隆的熱圖被投影到mATTum-adj T細(xì)胞UMAP上，如圖7B-D所示。同樣，將腫瘤中發(fā)現(xiàn)的腫瘤克隆和雙組織克隆（圖7E和F）投影到腫瘤T細(xì)胞UMAP上，如圖6C所示。單組織克隆分布在每個(gè)飲食基因型組中所有鑒定的T細(xì)胞群中（圖7B-D）。瘦TREM2+/+腫瘤主要含有CD8+ TEM雙組織克隆，而瘦TREM2-/-腫瘤顯示雙組織克隆分布在CD8+ TEX、CD8+ TEM和CD4+ Th1人群中（圖7E）。兩個(gè)肥胖基因型組在腫瘤中主要存在CD8+ TEM雙組織克?。▓D7E）。然而，減肥動(dòng)物表現(xiàn)出與瘦動(dòng)物不同的表型，其中TREM2+/+腫瘤在CD8+ TEX、CD8+ TEM和CD4+ Th1群體中表現(xiàn)出雙組織克隆的擴(kuò)散，TREM2-/-腫瘤主要包含CD8+ TEM克?。▓D7E）。mATTum-adj雙組織克隆的熱圖顯示，與TREM2+/+飲食匹配的對(duì)照組相比，苗條和肥胖的TREM2-/- mATTum-adj表現(xiàn)出更多的雙組織克?。蝗欢?，兩個(gè)減肥組都顯示mATTum-adj內(nèi)雙組織克隆的減少（圖7F）。

         隨后，作者量化了mATTum-adj中僅脂肪克隆型和雙組織克隆型的數(shù)量。該分析顯示，在幾乎每一組中，至少40%在mATTum-adj中鑒定的克隆型也在腫瘤中發(fā)現(xiàn)（圖7G）。該分析還顯示，與飲食匹配的TREM2+/+對(duì)照相比，瘦和肥胖TREM2-/- mATTum-adj的雙組織克隆型增加，同時(shí)兩個(gè)減肥組的克隆型數(shù)量顯著減少。腫瘤中克隆型的定量顯示，在mATTum-adj中也檢測(cè)到明顯較小比例的克隆型（圖7H）。此后，作者量化了每個(gè)組織中克隆型的細(xì)胞計(jì)數(shù)，并使用mATTum-adj中的粗T細(xì)胞聚類(lèi)和腫瘤中的細(xì)T細(xì)胞聚類(lèi)進(jìn)一步分類(lèi)數(shù)據(jù)。在mATTum-adj中，與瘦TREM2+/+對(duì)照相比，瘦TREM2-/-樣品中的雙組織CD8+ T細(xì)胞增加，肥胖TREM2-/-動(dòng)物中的雙組織CD8+ T細(xì)胞進(jìn)一步增加。相比之下，減肥組TREM2-/- mATTum-adj中CD8+ T細(xì)胞的數(shù)量比減肥組TREM2+/+ mAT中減少（圖7I）。同時(shí)，在腫瘤中，與飲食匹配的TREM2+/+腫瘤相比，瘦和肥胖TREM2-/-腫瘤中雙組織CD8+ TEM、CD8+ TEX和CD4+ Th1細(xì)胞計(jì)數(shù)顯著增加，瘦TREM2-/-腫瘤中雙組織T細(xì)胞數(shù)量最多（圖7J）。與mATTum-adj相似，減肥腫瘤在TREM2-/-動(dòng)物中表現(xiàn)出雙組織T細(xì)胞的減少（圖7J）。脂肪克隆細(xì)胞計(jì)數(shù)主要由自然殺傷T細(xì)胞（NKT）和Treg克隆組成，表明NKT和Treg群體主要局限于mATTum-adj。相反，CD8+ T細(xì)胞似乎更有可能被鑒定為mATTum-adj和腫瘤之間的雙組織克?。▓D7K）。相比之下，在腫瘤克隆細(xì)胞計(jì)數(shù)分析中，每個(gè)飲食基因型組擁有所有T細(xì)胞群（圖7L）。

圖8 肥胖小鼠對(duì)αPD-1治療沒(méi)有反應(yīng)，也沒(méi)有表現(xiàn)出mATTum-adj或腫瘤中T細(xì)胞激活標(biāo)記物的增加

8. 肥胖小鼠對(duì)αPD-1治療有抗性，并且沒(méi)有表現(xiàn)出活化T細(xì)胞的增加

         黑色素瘤和非小細(xì)胞肺癌的臨床研究表明，肥胖可能會(huì)導(dǎo)致免疫檢查點(diǎn)抑制劑的“矛盾效應(yīng)”，肥胖患者的反應(yīng)比瘦患者更有利；然而，這在絕經(jīng)后乳腺癌或減肥的情況下還沒(méi)有得到很好的研究。與肥胖小鼠的腫瘤相比，來(lái)自TREM2+/+瘦和減肥小鼠的腫瘤每克腫瘤中所有T細(xì)胞群的數(shù)量更高，高克隆CD8+ TEX細(xì)胞的豐度更高（圖6A和J）。為了研究肥胖和減肥對(duì)絕經(jīng)后乳腺癌模型中αPD-1治療的影響，作者制作了切除卵巢的瘦、肥胖和減肥組，記錄食物攝入量和體重。在20周時(shí)給小鼠注射E0771PD-L1細(xì)胞，在腫瘤監(jiān)測(cè)的最后8天注射IgG或αPD-1抗體（圖8A）。瘦小鼠對(duì)αPD-1治療有反應(yīng)，表現(xiàn)為腫瘤質(zhì)量和體積減小，多只小鼠的腫瘤質(zhì)量和體積完全消退（圖8B和C）。肥胖IgG組和αPD-1治療組在任何時(shí)間點(diǎn)的腫瘤質(zhì)量/體積均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（圖8B和D）。然而，減肥小鼠對(duì)αPD-1治療也有反應(yīng)，表現(xiàn)為腫瘤質(zhì)量和體積減?。▓D8B和E）。通過(guò)分離和順序磁分選從mATTum-adj中分離出CD11b+細(xì)胞和T細(xì)胞（圖8F）。與瘦IgG處理組相比，瘦αPD-1處理的mATTum-adjT細(xì)胞中T細(xì)胞活化標(biāo)志物Pdcd1、Tigit、Tox和Lag3的基因表達(dá)增加（圖8G）。在肥胖組內(nèi)，抗體治療組間T細(xì)胞活化標(biāo)記物表達(dá)無(wú)差異；然而，與瘦α PD -1處理的動(dòng)物相比，肥胖α PD-1處理組的Pdcd1、Tox和Lag3表達(dá)降低（圖8G）。腫瘤全組織裂解物顯示，減肥αPD-1治療組Cd8a、Pdcd1、Lag3和TREM2均升高，肥胖組無(wú)差異（圖8H）。此外，在分離的CD11b+細(xì)胞中，LAM基因TREM2、Plin2和Cd36的表達(dá)在肥胖的mATTum-adj和mATContra中復(fù)制了LAM的增加，而αPD-1治療不受影響。

結(jié)論：

         通過(guò)研究不同背景下的肥胖和體重減輕，包括TREM2缺乏和免疫檢查點(diǎn)治療，并評(píng)估所有研究中的腫瘤和周?chē)窘M織，獲得了體重史對(duì)脂肪組織和腫瘤微環(huán)境影響的重要見(jiàn)解。本研究的數(shù)據(jù)表明這些組織之間存在潛在的串?dāng)_，可能涉及T細(xì)胞運(yùn)輸。這些發(fā)現(xiàn)表明，體重史是臨床醫(yī)生在患者護(hù)理中考慮的一個(gè)關(guān)鍵因素，因?yàn)樗挠绊懣赡芤蚓唧w的臨床情況而異。

實(shí)驗(yàn)方法：

         TREM2+/+和TREM2?/?研究、腫瘤細(xì)胞植入、野生型小鼠研究、體組成和糖耐量試驗(yàn)、磁性分選、IgG和αPD-1給藥、可溶性TREM2定量、脂肪組織間質(zhì)血管組分分離、腫瘤單細(xì)胞解離、scRNA-seq、scRNA-seq數(shù)據(jù)處理、降維和數(shù)據(jù)整合、無(wú)監(jiān)督聚類(lèi)和細(xì)胞注釋、差異表達(dá)分析、RNA分離、cDNA合成和RT-PCR

參考文獻(xiàn)：

         Pierro, E. W., Cottam, M. A., An, H., Lehmann, B. D., Pietenpol, J. A., Wellen, K. E., Makowski, L., Rathmell, J. C., Fingleton, B., & Hasty, A. H. (2025). Comparison of Lean, Obese, and Weight-Loss Models Reveals TREM2 Deficiency Attenuates Breast Cancer Growth Uniquely in Lean Mice and Alters Clonal T-cell Populations. Cancer research, 85(7), 1219–1235.